中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
15期
2832-2835
,共4页
叶新春%何红军%杨峰%赵科鹏%姚君%刘斌
葉新春%何紅軍%楊峰%趙科鵬%姚君%劉斌
협신춘%하홍군%양봉%조과붕%요군%류빈
星形胶质细胞%脂肪基质细胞%诱导分化
星形膠質細胞%脂肪基質細胞%誘導分化
성형효질세포%지방기질세포%유도분화
目的:观察海马区星形胶质细胞培养上清液能否在体外诱导人脂肪基质细胞向神经元样细胞分化.方法:实验于2004-10/2005-06在华北煤炭医学院中心实验室完成.在无菌条件下从Wistar乳鼠分离出海马组织,从分离的海马组织中获得星形胶质细胞,并收集其培养上清液.取外科手术获得的人腹部皮下脂肪组织进行人脂肪基质细胞的原代培养.30例患者均知情同意.取第3代人脂肪基质细胞接种到培养孔中,预先放置无菌盖玻片的24孔培养板,制备细胞爬片或者接种到培养瓶中,细胞生长达50%～60%融合时,去除培养液,换为海马区星形胶质细胞培养上清诱导液进行诱导,对照组培养液为无血清培养基.倒置相差显微镜下连续观察细胞生长情况和形态变化,应用免疫细胞化学、鉴定神经前体细胞的特异性标志神经巢蛋白、神经细胞的特异性标志神经元特异性烯醇化酶、微管联合蛋白2和神经胶质细胞的特异性标志胶质纤维酸性蛋白的表达.结果:①诱导培养第3天,部分人脂肪基质细胞开始变形,从原先的细长梭状细胞变成神经元样细胞,可见细胞伸出突起,多为双极或多极细胞.②刚分离接种的人脂肪基质细胞镜下呈圆形,悬浮状态,接种后24 h内贴壁,并开始伸展,多呈梭形.1周后细胞融合成单层,排列出现方向性,但有少量圆形及卵圆形细胞混杂生长.③第4,5代人脂肪基质细胞在诱导48 h后形态即开始发生变化,扁平的胞体较预诱导后逐渐回缩,向外伸出突起,72 h后扁平的胞浆向胞核收缩,突起继续延长,以后随时间进展,具有典型神经细胞形态特点的细胞数量逐渐增多,形成双极或多极细胞.④免疫细胞化学检测人脂肪基质细胞诱导5 d后发现有(10.5±3.7)%神经巢蛋白、(38.4±5.2)%胶质纤维酸性蛋白、(15.7±2.3)%神经元特异性烯醇化酶表达,未见微管联合蛋白2的表达.结论:海马区星形胶质细胞培养上清液可以在体外诱导人脂肪基质细胞向神经元样细胞方向分化.
目的:觀察海馬區星形膠質細胞培養上清液能否在體外誘導人脂肪基質細胞嚮神經元樣細胞分化.方法:實驗于2004-10/2005-06在華北煤炭醫學院中心實驗室完成.在無菌條件下從Wistar乳鼠分離齣海馬組織,從分離的海馬組織中穫得星形膠質細胞,併收集其培養上清液.取外科手術穫得的人腹部皮下脂肪組織進行人脂肪基質細胞的原代培養.30例患者均知情同意.取第3代人脂肪基質細胞接種到培養孔中,預先放置無菌蓋玻片的24孔培養闆,製備細胞爬片或者接種到培養瓶中,細胞生長達50%～60%融閤時,去除培養液,換為海馬區星形膠質細胞培養上清誘導液進行誘導,對照組培養液為無血清培養基.倒置相差顯微鏡下連續觀察細胞生長情況和形態變化,應用免疫細胞化學、鑒定神經前體細胞的特異性標誌神經巢蛋白、神經細胞的特異性標誌神經元特異性烯醇化酶、微管聯閤蛋白2和神經膠質細胞的特異性標誌膠質纖維痠性蛋白的錶達.結果:①誘導培養第3天,部分人脂肪基質細胞開始變形,從原先的細長梭狀細胞變成神經元樣細胞,可見細胞伸齣突起,多為雙極或多極細胞.②剛分離接種的人脂肪基質細胞鏡下呈圓形,懸浮狀態,接種後24 h內貼壁,併開始伸展,多呈梭形.1週後細胞融閤成單層,排列齣現方嚮性,但有少量圓形及卵圓形細胞混雜生長.③第4,5代人脂肪基質細胞在誘導48 h後形態即開始髮生變化,扁平的胞體較預誘導後逐漸迴縮,嚮外伸齣突起,72 h後扁平的胞漿嚮胞覈收縮,突起繼續延長,以後隨時間進展,具有典型神經細胞形態特點的細胞數量逐漸增多,形成雙極或多極細胞.④免疫細胞化學檢測人脂肪基質細胞誘導5 d後髮現有(10.5±3.7)%神經巢蛋白、(38.4±5.2)%膠質纖維痠性蛋白、(15.7±2.3)%神經元特異性烯醇化酶錶達,未見微管聯閤蛋白2的錶達.結論:海馬區星形膠質細胞培養上清液可以在體外誘導人脂肪基質細胞嚮神經元樣細胞方嚮分化.
목적:관찰해마구성형효질세포배양상청액능부재체외유도인지방기질세포향신경원양세포분화.방법:실험우2004-10/2005-06재화북매탄의학원중심실험실완성.재무균조건하종Wistar유서분리출해마조직,종분리적해마조직중획득성형효질세포,병수집기배양상청액.취외과수술획득적인복부피하지방조직진행인지방기질세포적원대배양.30례환자균지정동의.취제3대인지방기질세포접충도배양공중,예선방치무균개파편적24공배양판,제비세포파편혹자접충도배양병중,세포생장체50%～60%융합시,거제배양액,환위해마구성형효질세포배양상청유도액진행유도,대조조배양액위무혈청배양기.도치상차현미경하련속관찰세포생장정황화형태변화,응용면역세포화학、감정신경전체세포적특이성표지신경소단백、신경세포적특이성표지신경원특이성희순화매、미관연합단백2화신경효질세포적특이성표지효질섬유산성단백적표체.결과:①유도배양제3천,부분인지방기질세포개시변형,종원선적세장사상세포변성신경원양세포,가견세포신출돌기,다위쌍겁혹다겁세포.②강분리접충적인지방기질세포경하정원형,현부상태,접충후24 h내첩벽,병개시신전,다정사형.1주후세포융합성단층,배렬출현방향성,단유소량원형급란원형세포혼잡생장.③제4,5대인지방기질세포재유도48 h후형태즉개시발생변화,편평적포체교예유도후축점회축,향외신출돌기,72 h후편평적포장향포핵수축,돌기계속연장,이후수시간진전,구유전형신경세포형태특점적세포수량축점증다,형성쌍겁혹다겁세포.④면역세포화학검측인지방기질세포유도5 d후발현유(10.5±3.7)%신경소단백、(38.4±5.2)%효질섬유산성단백、(15.7±2.3)%신경원특이성희순화매표체,미견미관연합단백2적표체.결론:해마구성형효질세포배양상청액가이재체외유도인지방기질세포향신경원양세포방향분화.
