热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2006年
2期
124-126,152
,共4页
付涌水%江朝富%曹开源%李树浓
付湧水%江朝富%曹開源%李樹濃
부용수%강조부%조개원%리수농
抗-D抗体%表达载体%构建
抗-D抗體%錶達載體%構建
항-D항체%표체재체%구건
目的构建含完整人抗-D抗体重、轻链基因的表达载体,为体外表达完整的抗-D抗体分子打下基础.方法从1株分泌IgM抗-D的细胞株提取总RNA,以随机引物逆转录成cDNA,用所设计的抗体前导区引物进行扩增,克隆、测序后将抗-D抗体重、轻链可变区基因分别和带有人IgG1恒定区和K轻链恒定区的表达载体连接,转化大肠杆菌后提取质粒DNA,用PCR和酶切进行鉴定.结果序列分析发现所扩增的基因符合人Ig的特征,除引导序列外,其余序列和我们以前所发表的Fab段序列一致,PCR和酶切鉴定抗体重、轻可变区基因克隆成功.结论成功地扩增了带引导序列的抗-D抗体可变区基因,并构建了完整人抗-D抗体分子表达载体.
目的構建含完整人抗-D抗體重、輕鏈基因的錶達載體,為體外錶達完整的抗-D抗體分子打下基礎.方法從1株分泌IgM抗-D的細胞株提取總RNA,以隨機引物逆轉錄成cDNA,用所設計的抗體前導區引物進行擴增,剋隆、測序後將抗-D抗體重、輕鏈可變區基因分彆和帶有人IgG1恆定區和K輕鏈恆定區的錶達載體連接,轉化大腸桿菌後提取質粒DNA,用PCR和酶切進行鑒定.結果序列分析髮現所擴增的基因符閤人Ig的特徵,除引導序列外,其餘序列和我們以前所髮錶的Fab段序列一緻,PCR和酶切鑒定抗體重、輕可變區基因剋隆成功.結論成功地擴增瞭帶引導序列的抗-D抗體可變區基因,併構建瞭完整人抗-D抗體分子錶達載體.
목적구건함완정인항-D항체중、경련기인적표체재체,위체외표체완정적항-D항체분자타하기출.방법종1주분비IgM항-D적세포주제취총RNA,이수궤인물역전록성cDNA,용소설계적항체전도구인물진행확증,극륭、측서후장항-D항체중、경련가변구기인분별화대유인IgG1항정구화K경련항정구적표체재체련접,전화대장간균후제취질립DNA,용PCR화매절진행감정.결과서렬분석발현소확증적기인부합인Ig적특정,제인도서렬외,기여서렬화아문이전소발표적Fab단서렬일치,PCR화매절감정항체중、경가변구기인극륭성공.결론성공지확증료대인도서렬적항-D항체가변구기인,병구건료완정인항-D항체분자표체재체.
