分子植物育种
分子植物育種
분자식물육충
MOLECULAR PLANT BREEDING
2004年
6期
777-782
,共6页
黄益洪%刘春光%马鸿翔%刘根齐%周淼平%孙勇如%余桂红%陆维忠
黃益洪%劉春光%馬鴻翔%劉根齊%週淼平%孫勇如%餘桂紅%陸維忠
황익홍%류춘광%마홍상%류근제%주묘평%손용여%여계홍%륙유충
小麦%花粉管途径%转化%bar基因%筛选方法
小麥%花粉管途徑%轉化%bar基因%篩選方法
소맥%화분관도경%전화%bar기인%사선방법
本文报道了一种从大量花粉管途径转化处理后代中快速有效地筛选到转基因植株的方法.转化质粒为含bar筛选标记基因的天麻抗真菌蛋白(GAFP)与兔防御素(NP-1)双价抗病基因植物表达载体(pBI35S-gafp-NP1-bar),受体小麦品种为扬麦158和Alondra.对花粉管途径转化处理获得的种子分3步进行筛选鉴定:首先,转化处理种子密播于塑料盘中,待小苗长到3叶期时,用浓度为120mg/L的Basta除草剂弥雾喷施筛选,约10d后绝大部分小苗变黄枯死,只有约1%的高抗Basta除草剂的T0小苗存活;然后对其Basta抗性植株用gafp基因引物进行PCR检测,其中62.5%的Basta抗性植株为PCR阳性;最后将T0代PCR阳性植株后代种子(T1)分别发芽并按株系混合取样提取DNA,分别用gafp和bar基因引物进行PCR检测验证,结果均为阳性.表明外源基因已整合入小麦基因组并由T0代植株稳定遗传到T1代,同时证明该筛选方法是可靠有效的.
本文報道瞭一種從大量花粉管途徑轉化處理後代中快速有效地篩選到轉基因植株的方法.轉化質粒為含bar篩選標記基因的天痳抗真菌蛋白(GAFP)與兔防禦素(NP-1)雙價抗病基因植物錶達載體(pBI35S-gafp-NP1-bar),受體小麥品種為颺麥158和Alondra.對花粉管途徑轉化處理穫得的種子分3步進行篩選鑒定:首先,轉化處理種子密播于塑料盤中,待小苗長到3葉期時,用濃度為120mg/L的Basta除草劑瀰霧噴施篩選,約10d後絕大部分小苗變黃枯死,隻有約1%的高抗Basta除草劑的T0小苗存活;然後對其Basta抗性植株用gafp基因引物進行PCR檢測,其中62.5%的Basta抗性植株為PCR暘性;最後將T0代PCR暘性植株後代種子(T1)分彆髮芽併按株繫混閤取樣提取DNA,分彆用gafp和bar基因引物進行PCR檢測驗證,結果均為暘性.錶明外源基因已整閤入小麥基因組併由T0代植株穩定遺傳到T1代,同時證明該篩選方法是可靠有效的.
본문보도료일충종대량화분관도경전화처리후대중쾌속유효지사선도전기인식주적방법.전화질립위함bar사선표기기인적천마항진균단백(GAFP)여토방어소(NP-1)쌍개항병기인식물표체재체(pBI35S-gafp-NP1-bar),수체소맥품충위양맥158화Alondra.대화분관도경전화처리획득적충자분3보진행사선감정:수선,전화처리충자밀파우소료반중,대소묘장도3협기시,용농도위120mg/L적Basta제초제미무분시사선,약10d후절대부분소묘변황고사,지유약1%적고항Basta제초제적T0소묘존활;연후대기Basta항성식주용gafp기인인물진행PCR검측,기중62.5%적Basta항성식주위PCR양성;최후장T0대PCR양성식주후대충자(T1)분별발아병안주계혼합취양제취DNA,분별용gafp화bar기인인물진행PCR검측험증,결과균위양성.표명외원기인이정합입소맥기인조병유T0대식주은정유전도T1대,동시증명해사선방법시가고유효적.
