中国药理学通报
中國藥理學通報
중국약이학통보
CHINESE PHARMACOLOGICAL BULLETIN
2004年
6期
644-647
,共4页
杜洪震%赵雪梅%潘杨杏%张冀民%梁平
杜洪震%趙雪梅%潘楊杏%張冀民%樑平
두홍진%조설매%반양행%장기민%량평
阿尔采末病%Aβ多肽%基因表达%亲和层析
阿爾採末病%Aβ多肽%基因錶達%親和層析
아이채말병%Aβ다태%기인표체%친화층석
目的通过对Aβ多肽基因进行重组克隆,构建质粒和高效表达的菌株,并研究表达产物快速高效的纯化回收方法.方法采用IMPACT-TWIN 表达系统构建Intein-Aβ重组基因表达质粒,将该质粒转化至BL21(DE3),筛选高效表达菌株;表达产物经Chitin Beads亲和层析柱分离纯化;SDS-PAGE电泳,毛细管区带电泳及免疫印迹法等鉴定.结果重组的Intein-Aβ基因在BL21中获得高效表达,筛选出稳定高效表达的BL21(DE3)细胞株;融合蛋白表达量可达全菌蛋白的60%;表达产物经Chitin Beads亲和层析纯化后,其纯度可达98%以上,并具有与Aβ多肽相同的分子量及免疫学活性.结论 Aβ多肽基因在IMPACT-TWIN系统中可获得高效表达,利用Chitin Beads亲和层析方法可将表达的Aβ多肽进行快速、简便、无酶化的高效分离纯化.
目的通過對Aβ多肽基因進行重組剋隆,構建質粒和高效錶達的菌株,併研究錶達產物快速高效的純化迴收方法.方法採用IMPACT-TWIN 錶達繫統構建Intein-Aβ重組基因錶達質粒,將該質粒轉化至BL21(DE3),篩選高效錶達菌株;錶達產物經Chitin Beads親和層析柱分離純化;SDS-PAGE電泳,毛細管區帶電泳及免疫印跡法等鑒定.結果重組的Intein-Aβ基因在BL21中穫得高效錶達,篩選齣穩定高效錶達的BL21(DE3)細胞株;融閤蛋白錶達量可達全菌蛋白的60%;錶達產物經Chitin Beads親和層析純化後,其純度可達98%以上,併具有與Aβ多肽相同的分子量及免疫學活性.結論 Aβ多肽基因在IMPACT-TWIN繫統中可穫得高效錶達,利用Chitin Beads親和層析方法可將錶達的Aβ多肽進行快速、簡便、無酶化的高效分離純化.
목적통과대Aβ다태기인진행중조극륭,구건질립화고효표체적균주,병연구표체산물쾌속고효적순화회수방법.방법채용IMPACT-TWIN 표체계통구건Intein-Aβ중조기인표체질립,장해질립전화지BL21(DE3),사선고효표체균주;표체산물경Chitin Beads친화층석주분리순화;SDS-PAGE전영,모세관구대전영급면역인적법등감정.결과중조적Intein-Aβ기인재BL21중획득고효표체,사선출은정고효표체적BL21(DE3)세포주;융합단백표체량가체전균단백적60%;표체산물경Chitin Beads친화층석순화후,기순도가체98%이상,병구유여Aβ다태상동적분자량급면역학활성.결론 Aβ다태기인재IMPACT-TWIN계통중가획득고효표체,이용Chitin Beads친화층석방법가장표체적Aβ다태진행쾌속、간편、무매화적고효분리순화.
