临床检验杂志
臨床檢驗雜誌
림상검험잡지
2004年
3期
168-171
,共4页
郑卫东%郑怀竞%杨泽%从冠宁
鄭衛東%鄭懷競%楊澤%從冠寧
정위동%정부경%양택%종관저
通用TaqMan探针%等位基因特异的扩增%实时聚合酶链反应%单核苷酸多态性
通用TaqMan探針%等位基因特異的擴增%實時聚閤酶鏈反應%單覈苷痠多態性
통용TaqMan탐침%등위기인특이적확증%실시취합매련반응%단핵감산다태성
目的建立一种基于通用TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR方法,用于检测apoE基因第四外显子上的一个单核苷酸多态性(SNP)位点(3937T/C).方法应用PCR-RFLP分型方法建立apoE 3937T/C多态性分析的参考样本,同时对部分样本进行PCR产物直接测序以验证PCR-RFLP分型结果.选择一对能够有效区分3937T/C多态性的等位基因特异的上游引物,配对进行通用YaqMan探针实时PCR扩增,然后通过比较两个平行反应达到阈值时所经历的循环数(Ct)的大小,对apoE 3937T/C多态性进行区分.结果建立的基于通用TaqMan探针技术的实时荧光PCR方法,用于apoE基因第四外显子上3937T/C SNP分析,检测结果与PCR-RFLP方法、DNA测序法结果完全一致.结论在进行PCR扩增条件优化的前提下,应用通用TaqMan探针对PCR进行全程监测是可行而且是非常经济的;基于通用TaqMan探针技术的等位基因特异的实时荧光PCR方法敏感、简单、快速,可实现对apoE基因3937T/C单核苷酸多态性的快速检测,而且在其他的SNP位点高通量分析中具有潜在的应用价值.
目的建立一種基于通用TaqMan探針技術的快速、準確且經濟的實時熒光PCR方法,用于檢測apoE基因第四外顯子上的一箇單覈苷痠多態性(SNP)位點(3937T/C).方法應用PCR-RFLP分型方法建立apoE 3937T/C多態性分析的參攷樣本,同時對部分樣本進行PCR產物直接測序以驗證PCR-RFLP分型結果.選擇一對能夠有效區分3937T/C多態性的等位基因特異的上遊引物,配對進行通用YaqMan探針實時PCR擴增,然後通過比較兩箇平行反應達到閾值時所經歷的循環數(Ct)的大小,對apoE 3937T/C多態性進行區分.結果建立的基于通用TaqMan探針技術的實時熒光PCR方法,用于apoE基因第四外顯子上3937T/C SNP分析,檢測結果與PCR-RFLP方法、DNA測序法結果完全一緻.結論在進行PCR擴增條件優化的前提下,應用通用TaqMan探針對PCR進行全程鑑測是可行而且是非常經濟的;基于通用TaqMan探針技術的等位基因特異的實時熒光PCR方法敏感、簡單、快速,可實現對apoE基因3937T/C單覈苷痠多態性的快速檢測,而且在其他的SNP位點高通量分析中具有潛在的應用價值.
목적건립일충기우통용TaqMan탐침기술적쾌속、준학차경제적실시형광PCR방법,용우검측apoE기인제사외현자상적일개단핵감산다태성(SNP)위점(3937T/C).방법응용PCR-RFLP분형방법건립apoE 3937T/C다태성분석적삼고양본,동시대부분양본진행PCR산물직접측서이험증PCR-RFLP분형결과.선택일대능구유효구분3937T/C다태성적등위기인특이적상유인물,배대진행통용YaqMan탐침실시PCR확증,연후통과비교량개평행반응체도역치시소경력적순배수(Ct)적대소,대apoE 3937T/C다태성진행구분.결과건립적기우통용TaqMan탐침기술적실시형광PCR방법,용우apoE기인제사외현자상3937T/C SNP분석,검측결과여PCR-RFLP방법、DNA측서법결과완전일치.결론재진행PCR확증조건우화적전제하,응용통용TaqMan탐침대PCR진행전정감측시가행이차시비상경제적;기우통용TaqMan탐침기술적등위기인특이적실시형광PCR방법민감、간단、쾌속,가실현대apoE기인3937T/C단핵감산다태성적쾌속검측,이차재기타적SNP위점고통량분석중구유잠재적응용개치.
