生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2006年
7期
653-659
,共7页
陈熙%崔香菊%YING-XIN ZHAO%张炜
陳熙%崔香菊%YING-XIN ZHAO%張煒
진희%최향국%YING-XIN ZHAO%장위
蓝绿温和胶凝胶电泳%低叶绿素b突变体%水稻(Oryza sativa L.)%类囊体膜%比较蛋白质组学
藍綠溫和膠凝膠電泳%低葉綠素b突變體%水稻(Oryza sativa L.)%類囊體膜%比較蛋白質組學
람록온화효응효전영%저협록소b돌변체%수도(Oryza sativa L.)%류낭체막%비교단백질조학
采用蓝绿温和胶凝胶电泳(blue-native polyacrylamide gel-electrophoresis,BN-PAGE),以及改进的第二向SDS-PAGE分离了水稻低叶绿素b突变体ZH249-Y和野生型ZH249-W类囊体膜蛋白复合物,系统比较了突变体和野生型各复合物亚基的表达差异.结果显示,第一向BN-PAGE分离了PS Ⅰ-LHC Ⅰ、LHC Ⅰ缺失的PS Ⅰ、ATP合成酶、细胞色素b6f、 CP43缺失的PSⅡ及LHCⅡ六种复合物.上述各复合物经第二相SDS-Urea-PAGE分离后,利用胶内酶解,高效液相层析分离肽段,电喷雾串联质谱鉴定了复合物的亚基.结合免疫印迹研究,证明和野生型相比,突变体光系统Ⅱ捕光天线复合体的表达量适度下降,但光系统Ⅰ捕光天线破坏严重,同时光系统Ⅱ核心蛋白和ATP合成酶的表达量上升.研究结果对揭示低叶绿素b水稻突变体较高光化学效率和光稳定性的分子基础提供了线索,同时也表明,改进的BN/SDS-PAGE双向电泳不仅可以有效地分离膜蛋白复合物及亚基,也可以进行不同生理条件下,或野生型和突变体之间膜蛋白质组的比较研究.
採用藍綠溫和膠凝膠電泳(blue-native polyacrylamide gel-electrophoresis,BN-PAGE),以及改進的第二嚮SDS-PAGE分離瞭水稻低葉綠素b突變體ZH249-Y和野生型ZH249-W類囊體膜蛋白複閤物,繫統比較瞭突變體和野生型各複閤物亞基的錶達差異.結果顯示,第一嚮BN-PAGE分離瞭PS Ⅰ-LHC Ⅰ、LHC Ⅰ缺失的PS Ⅰ、ATP閤成酶、細胞色素b6f、 CP43缺失的PSⅡ及LHCⅡ六種複閤物.上述各複閤物經第二相SDS-Urea-PAGE分離後,利用膠內酶解,高效液相層析分離肽段,電噴霧串聯質譜鑒定瞭複閤物的亞基.結閤免疫印跡研究,證明和野生型相比,突變體光繫統Ⅱ捕光天線複閤體的錶達量適度下降,但光繫統Ⅰ捕光天線破壞嚴重,同時光繫統Ⅱ覈心蛋白和ATP閤成酶的錶達量上升.研究結果對揭示低葉綠素b水稻突變體較高光化學效率和光穩定性的分子基礎提供瞭線索,同時也錶明,改進的BN/SDS-PAGE雙嚮電泳不僅可以有效地分離膜蛋白複閤物及亞基,也可以進行不同生理條件下,或野生型和突變體之間膜蛋白質組的比較研究.
채용람록온화효응효전영(blue-native polyacrylamide gel-electrophoresis,BN-PAGE),이급개진적제이향SDS-PAGE분리료수도저협록소b돌변체ZH249-Y화야생형ZH249-W류낭체막단백복합물,계통비교료돌변체화야생형각복합물아기적표체차이.결과현시,제일향BN-PAGE분리료PS Ⅰ-LHC Ⅰ、LHC Ⅰ결실적PS Ⅰ、ATP합성매、세포색소b6f、 CP43결실적PSⅡ급LHCⅡ륙충복합물.상술각복합물경제이상SDS-Urea-PAGE분리후,이용효내매해,고효액상층석분리태단,전분무천련질보감정료복합물적아기.결합면역인적연구,증명화야생형상비,돌변체광계통Ⅱ포광천선복합체적표체량괄도하강,단광계통Ⅰ포광천선파배엄중,동시광계통Ⅱ핵심단백화ATP합성매적표체량상승.연구결과대게시저협록소b수도돌변체교고광화학효솔화광은정성적분자기출제공료선색,동시야표명,개진적BN/SDS-PAGE쌍향전영불부가이유효지분리막단백복합물급아기,야가이진행불동생리조건하,혹야생형화돌변체지간막단백질조적비교연구.
