CAJ | 학술논문

本研究根据口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因的序列,设计并合成了1对用于扩增整个VP1基因的引物(5P、P6).从细胞培养液或组织中提取总RNA,通过PT-PCR扩增,从F29株、O3I3株和T509株中均获得了1条约740bp的DNA电泳带.将PCR产物双酶切后电泳回收,插入到相应双酶切的pUC18质粒中,获得了重组质粒.通过PCR鉴定,证明重组质粒pUCVP1/F29、pUCVP1/O313、pUCVP1/T509均插入了VP1基因.对上述3个重组质粒进行测序后分析,F29强毒株与O3I3、T509弱毒株相比,其核苷酸序列同源性分别为98.75%和99.06%;因F29株核苷酸发生3个碱基缺失与1个碱基替换,故推导的氨基酸序列同源性分别仅为44.13%和41.32%;而T509株与O3I3株相比,其核苷酸、氨基酸序列同源性分别为99.37%和95.31%.通过序列分析发现,本研究的3个毒株与国内大多数毒株(包括1997年台湾暴发FMDV所分离的毒株,除O/A/58株外)均属于同一基因型,核苷酸序列同源性为85%～94%;而与国外毒株相比,属不同的基因型,核苷酸序列同源性仅为81%～82%.其推导的氨基酸序列,除F29株与O/HK/93株及1997年台湾暴发FMDV分离的少数毒株的氨基酸序列同源性仅为45%～63%外,本研究的3个毒株与国内分离的大多数毒株的VP1基因的氨基酸序列同源性高达87%～95%.本项研究对猪O型FMDV的强弱毒株VP基因进行克隆与序列分析,将进一步丰富我国FMDV毒株VP1基因资料库,为更加科学地防制FMD提供分子水平依据.
본연구근거구제역병독(FMDV)VP1기인적서렬,설계병합성료1대용우확증정개VP1기인적인물(5P、P6).종세포배양액혹조직중제취총RNA,통과PT-PCR확증,종F29주、O3I3주화T509주중균획득료1조약740bp적DNA전영대.장PCR산물쌍매절후전영회수,삽입도상응쌍매절적pUC18질립중,획득료중조질립.통과PCR감정,증명중조질립pUCVP1/F29、pUCVP1/O313、pUCVP1/T509균삽입료VP1기인.대상술3개중조질립진행측서후분석,F29강독주여O3I3、T509약독주상비,기핵감산서렬동원성분별위98.75%화99.06%;인F29주핵감산발생3개감기결실여1개감기체환,고추도적안기산서렬동원성분별부위44.13%화41.32%;이T509주여O3I3주상비,기핵감산、안기산서렬동원성분별위99.37%화95.31%.통과서렬분석발현,본연구적3개독주여국내대다수독주(포괄1997년태만폭발FMDV소분리적독주,제O/A/58주외)균속우동일기인형,핵감산서렬동원성위85%～94%;이여국외독주상비,속불동적기인형,핵감산서렬동원성부위81%～82%.기추도적안기산서렬,제F29주여O/HK/93주급1997년태만폭발FMDV분리적소수독주적안기산서렬동원성부위45%～63%외,본연구적3개독주여국내분리적대다수독주적VP1기인적안기산서렬동원성고체87%～95%.본항연구대저O형FMDV적강약독주VP기인진행극륭여서렬분석,장진일보봉부아국FMDV독주VP1기인자료고,위경가과학지방제FMD제공분자수평의거.