CAJ | 학술논문

根据Jerne免疫网络理论，抗独持型抗体（Ab2β）在三维空间能够模拟Ab1所识别的抗原结构，可以替代肿瘤抗原作为抗肿瘤疫苗，激发机体体液免疫和细胞免疫应答。抗独特型抗体的这种分子模拟功能在肿瘤免疫治疗领域已展示出诱人的前景。但因杂交瘤技术制备的单克隆抗独特型抗体为鼠源性抗体，临床应用受到极大的限制。为解决这一难题，本实验采用体外致敏法结合噬菌体呈现技术构建鼻咽癌抗独特型噬菌体抗体库。以本室制备的抗鼻咽癌单抗FC2（Ab1）为免疫原，体外致敏并用EBV转化10例鼻咽癌患者PBMC，经Sandwich ELISA检测其中8例有Ab2产生。抽提致敏、转化的鼻咽癌患者B细胞的总RNA，用cDNA合成试剂盒反转录为cDNA，经多次PCR扩增出5种VH（γ、μ)和9种VL（κ、λ）基因，经简并组成15种ScFv基因，在体外与载体fuse5连接，电导入大肠杆菌MC1061，经四环素抗性筛选，得到库容为1．1×107的初级噬菌体抗体库。随机挑取20个菌落检查噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为70％。这不仅为进一步用抗鼻咽癌单抗亲和筛选具有内影像特点的抗独特型单链抗体（Ab2βScFv）奠定了基础，而且说明外致敏法结合噬菌体抗体库技术制备人源化Ab2βScFv的策略是完全可行的。
근거Jerne면역망락이론，항독지형항체（Ab2β）재삼유공간능구모의Ab1소식별적항원결구，가이체대종류항원작위항종류역묘，격발궤체체액면역화세포면역응답。항독특형항체적저충분자모의공능재종류면역치료영역이전시출유인적전경。단인잡교류기술제비적단극륭항독특형항체위서원성항체，림상응용수도겁대적한제。위해결저일난제，본실험채용체외치민법결합서균체정현기술구건비인암항독특형서균체항체고。이본실제비적항비인암단항FC2（Ab1）위면역원，체외치민병용EBV전화10례비인암환자PBMC，경Sandwich ELISA검측기중8례유Ab2산생。추제치민、전화적비인암환자B세포적총RNA，용cDNA합성시제합반전록위cDNA，경다차PCR확증출5충VH（γ、μ)화9충VL（κ、λ）기인，경간병조성15충ScFv기인，재체외여재체fuse5련접，전도입대장간균MC1061，경사배소항성사선，득도고용위1．1×107적초급서균체항체고。수궤도취20개균락검사서균체DNA중전장ScFv기인적삽입솔위70％。저불부위진일보용항비인암단항친화사선구유내영상특점적항독특형단련항체（Ab2βScFv）전정료기출，이차설명외치민법결합서균체항체고기술제비인원화Ab2βScFv적책략시완전가행적。