细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2001年
1期
8-12
,共5页
胡福泉%金晓琳%饶贤才%张克斌%胡晓梅%刘启富%庄合安%Arin Bhattachajee%张敏%李明
鬍福泉%金曉琳%饒賢纔%張剋斌%鬍曉梅%劉啟富%莊閤安%Arin Bhattachajee%張敏%李明
호복천%금효림%요현재%장극빈%호효매%류계부%장합안%Arin Bhattachajee%장민%리명
钙通道%克隆%一级结构%外显子
鈣通道%剋隆%一級結構%外顯子
개통도%극륭%일급결구%외현자
目的从大鼠胰腺β细胞中，克隆 LVA钙通道 (即 T-型钙通道 )基因，并鉴定其一级结构的特征。方法用 RT-PCR, 3′ -RACE及 5′ -RACE法，从总 RNA中克隆 T-型钙通道全长基因；用 DNA序列测定与 DNA步移实验，分析基因一级结构及外显子剪接。结果克隆了 T-型钙通道的全长结构基因，命名为α 1G-INS。该基因由 6864个碱基组成，编码 2288个氨基酸，与从神经组织中克隆的钙通道α 1G 相比较：在氨基酸水平上有 96.3％的同源性，在 4个结构域的跨膜区内的氨基酸及 I、 II结构域间的胞内环链部分的氨基酸具有高度保守性；两者间具有 3个明显不同的结构区段，基因组 DNA步移法分析表明，这种差异是由于 mRNA前体的不同剪接所致。此外，尚有 10个氨基酸替代散在于分子内其它区域，这种替代是由于基因突变造成的。结论成功地从大鼠胰腺β细胞中，克隆到 LVA钙通道基因中的 1个新亚型 (isoform)α 1G-INS，对深入研究钙离子所涉及的许多重要的基本生命过程有着重要的意义。
目的從大鼠胰腺β細胞中，剋隆 LVA鈣通道 (即 T-型鈣通道 )基因，併鑒定其一級結構的特徵。方法用 RT-PCR, 3′ -RACE及 5′ -RACE法，從總 RNA中剋隆 T-型鈣通道全長基因；用 DNA序列測定與 DNA步移實驗，分析基因一級結構及外顯子剪接。結果剋隆瞭 T-型鈣通道的全長結構基因，命名為α 1G-INS。該基因由 6864箇堿基組成，編碼 2288箇氨基痠，與從神經組織中剋隆的鈣通道α 1G 相比較：在氨基痠水平上有 96.3％的同源性，在 4箇結構域的跨膜區內的氨基痠及 I、 II結構域間的胞內環鏈部分的氨基痠具有高度保守性；兩者間具有 3箇明顯不同的結構區段，基因組 DNA步移法分析錶明，這種差異是由于 mRNA前體的不同剪接所緻。此外，尚有 10箇氨基痠替代散在于分子內其它區域，這種替代是由于基因突變造成的。結論成功地從大鼠胰腺β細胞中，剋隆到 LVA鈣通道基因中的 1箇新亞型 (isoform)α 1G-INS，對深入研究鈣離子所涉及的許多重要的基本生命過程有著重要的意義。
목적종대서이선β세포중，극륭 LVA개통도 (즉 T-형개통도 )기인，병감정기일급결구적특정。방법용 RT-PCR, 3′ -RACE급 5′ -RACE법，종총 RNA중극륭 T-형개통도전장기인；용 DNA서렬측정여 DNA보이실험，분석기인일급결구급외현자전접。결과극륭료 T-형개통도적전장결구기인，명명위α 1G-INS。해기인유 6864개감기조성，편마 2288개안기산，여종신경조직중극륭적개통도α 1G 상비교：재안기산수평상유 96.3％적동원성，재 4개결구역적과막구내적안기산급 I、 II결구역간적포내배련부분적안기산구유고도보수성；량자간구유 3개명현불동적결구구단，기인조 DNA보이법분석표명，저충차이시유우 mRNA전체적불동전접소치。차외，상유 10개안기산체대산재우분자내기타구역，저충체대시유우기인돌변조성적。결론성공지종대서이선β세포중，극륭도 LVA개통도기인중적 1개신아형 (isoform)α 1G-INS，대심입연구개리자소섭급적허다중요적기본생명과정유착중요적의의。
Aim To clone LVA calcium channel (also known as T-type calcium channel) from INS-1 cell line derived from rat pancreatic β cells. Methods RT-PCR, 3′ -RACE and 5′ -RACE were used to clone coding sequence of the whole gene. DNA sequencing and genomic DNA walking were used to identify the primary structure features and exons. Results The cloned gene, named as α 1 G-INS, was composed of 6 864 bp, encoding 2 288 amino acids, which shares 96.3％ identity to α 1G, the neuronal T-type calcium channel. Compared to α 1G, the amino acids in membrane-spanning regions of four transmembrane domains and intracellular loop LI-II of α 1G-INS were highly conserved, but there are three distinct regions. This discrepancy was due to alternative mRNA splicing. Scattering on other regions of the molecule there were 10 single amino acid substitutions, which could be explained as site-mutations of the gene. Conclusion A new isoform,α 1G-INS, of T-type calcium channel is successfully cloned from rat insulin-secreting cell line INS-1, which is significant to further understanding many Ca2＋ -involved biologically essential processes.
