湖南农业大学学报（自然科学版）
湖南農業大學學報（自然科學版）
호남농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF HUNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY(NATURAL SCIENCES)
1999年
5期
361-365
,共5页
刘勇%张德咏%王小平%周雪平%李德葆
劉勇%張德詠%王小平%週雪平%李德葆
류용%장덕영%왕소평%주설평%리덕보
黄瓜花叶病毒%外壳蛋白基因%克隆%检测
黃瓜花葉病毒%外殼蛋白基因%剋隆%檢測
황과화협병독%외각단백기인%극륭%검측
根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的HincⅡ位点.重组质粒经SmaⅠ酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7 kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性.
根據已經髮錶的黃瓜花葉病毒(CMV)外殼蛋白基因的序列,人工閤成引物,通過反轉錄和PCR擴增併剋隆瞭黃瓜花葉病毒辣椒分離物P33(CMV-P33)的外殼蛋白基因,構建到質粒PBS的HincⅡ位點.重組質粒經SmaⅠ酶切後,在0.8%低鎔點瓊脂糖上電泳,迴收剋隆的CP基因片段(約0.7 kb),用切口平移的方法進行α-32PdATP標記.以此為探針,通過點雜交技術檢測提純的病毒CMV-P33和R1株繫、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒葉片汁液,結果錶明:提純的CMV-P33和R1株繫的最低檢齣量分彆為1ng和4ng,CMV-P33的RNA為0.1ng.檢測受CMV侵染的辣椒葉片汁液時,最大稀釋倍數為100倍.其次,用該探針檢測健康辣椒和受煙草花葉病毒(TMV)、馬鈴藷Y病毒侵染的煙葉汁液時,檢測反應均為陰性.
근거이경발표적황과화협병독(CMV)외각단백기인적서렬,인공합성인물,통과반전록화PCR확증병극륭료황과화협병독랄초분리물P33(CMV-P33)적외각단백기인,구건도질립PBS적HincⅡ위점.중조질립경SmaⅠ매절후,재0.8%저용점경지당상전영,회수극륭적CP기인편단(약0.7 kb),용절구평이적방법진행α-32PdATP표기.이차위탐침,통과점잡교기술검측제순적병독CMV-P33화R1주계、CMV-P33적RNA,급수CMV침염적랄초협편즙액,결과표명:제순적CMV-P33화R1주계적최저검출량분별위1ng화4ng,CMV-P33적RNA위0.1ng.검측수CMV침염적랄초협편즙액시,최대희석배수위100배.기차,용해탐침검측건강랄초화수연초화협병독(TMV)、마령서Y병독침염적연협즙액시,검측반응균위음성.
