细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2003年
1期
45-48
,共4页
张庆殷%金永柱%张海滨%谢蜀生
張慶慇%金永柱%張海濱%謝蜀生
장경은%금영주%장해빈%사촉생
CTLA4Ig%腺病毒载体%同源重组%基因治疗%移植耐受
CTLA4Ig%腺病毒載體%同源重組%基因治療%移植耐受
CTLA4Ig%선병독재체%동원중조%기인치료%이식내수
目的: 通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体, 研究其生物学活性, 并用于基因治疗诱导心脏移植耐受.方法: 通过基因重组技术, 将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中. 然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组, 经过293细胞包装, 构建CTLA4Ig腺病毒载体.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技术, 检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌, 通过体外实验, 观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应( MLR)的抑制作用.通过大鼠体内实验, 检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后, CTLA4Ig在体内的表达.结果: CTLA4Ig腺病毒载体构建成功.体外实验证实, CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液, 能够抑制异基因脾细胞的单向MLR.体内实验表明, 经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体, 能够诱导移植耐受, 延长心脏移植物的存活.结论: 构建的CTLA4Ig腺病毒载体, 体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白.该蛋白可抑制T细胞的活化, CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受.
目的: 通過同源重組構建CTLA4Ig腺病毒載體, 研究其生物學活性, 併用于基因治療誘導心髒移植耐受.方法: 通過基因重組技術, 將CTLA4Ig基因剋隆至腺病毒穿梭質粒pCA13中. 然後將該質粒與腺病毒輔助質粒同源重組, 經過293細胞包裝, 構建CTLA4Ig腺病毒載體.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技術, 檢測包裝的病毒感染293細胞後CTLA4Ig蛋白的錶達及分泌, 通過體外實驗, 觀察病毒感染的293細胞上清對混閤淋巴細胞反應( MLR)的抑製作用.通過大鼠體內實驗, 檢測用CTLA4Ig腺病毒載體基因治療後, CTLA4Ig在體內的錶達.結果: CTLA4Ig腺病毒載體構建成功.體外實驗證實, CTLA4Ig腺病毒感染的293細胞上清液, 能夠抑製異基因脾細胞的單嚮MLR.體內實驗錶明, 經過靜脈途徑給予受體大鼠CTLA4Ig腺病毒載體, 能夠誘導移植耐受, 延長心髒移植物的存活.結論: 構建的CTLA4Ig腺病毒載體, 體外感染293細胞能夠分泌CTLA4Ig蛋白.該蛋白可抑製T細胞的活化, CTLA4Ig腺病毒載體可用于體內基因治療誘導移植耐受.
목적: 통과동원중조구건CTLA4Ig선병독재체, 연구기생물학활성, 병용우기인치료유도심장이식내수.방법: 통과기인중조기술, 장CTLA4Ig기인극륭지선병독천사질립pCA13중. 연후장해질립여선병독보조질립동원중조, 경과293세포포장, 구건CTLA4Ig선병독재체.용RT-PCR、SDS-PAGE급Western blot등기술, 검측포장적병독감염293세포후CTLA4Ig단백적표체급분비, 통과체외실험, 관찰병독감염적293세포상청대혼합림파세포반응( MLR)적억제작용.통과대서체내실험, 검측용CTLA4Ig선병독재체기인치료후, CTLA4Ig재체내적표체.결과: CTLA4Ig선병독재체구건성공.체외실험증실, CTLA4Ig선병독감염적293세포상청액, 능구억제이기인비세포적단향MLR.체내실험표명, 경과정맥도경급여수체대서CTLA4Ig선병독재체, 능구유도이식내수, 연장심장이식물적존활.결론: 구건적CTLA4Ig선병독재체, 체외감염293세포능구분비CTLA4Ig단백.해단백가억제T세포적활화, CTLA4Ig선병독재체가용우체내기인치료유도이식내수.
