中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
36期
7203-7206
,共4页
谯雁彬%赵敏%陈向晖%谢敏
譙雁彬%趙敏%陳嚮暉%謝敏
초안빈%조민%진향휘%사민
泪腺%细胞凋亡%Bcl-2%Bax%丙酸睾酮
淚腺%細胞凋亡%Bcl-2%Bax%丙痠睪酮
루선%세포조망%Bcl-2%Bax%병산고동
目的:分析丙酸睾酮抑制泪腺上皮细胞凋亡的机制,为干眼症的性激素防治提供科学的理论依据.方法:实验于2003-09/2004-01在重庆医科大学附属第一医院中心实验室完成.①实验材料:二三月龄新西兰健康白色家兔30只,无眼疾,雌性,体质量1.5～2.5 kg.丙酸睾酮(产品批号:020902,上海通用药业股份有限公司产品),用DMSO配成储存液,-70℃保存.分析纯过氧化氢购自北方同正生物技术发展有限公司.②实验方法:经耳缘静脉注射空气处死家兔,按常规无菌操作行泪腺摘除术,酶消化法分离兔泪腺上皮细胞.取二三代培养的泪腺上皮细胞,按约1×108 L-1密度接种于预置小玻片的24孔板内,培养4 d后,加入浓度为1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙酸睾酮,继续培养24 h,另以未加丙酸睾酮的培养液培养的同期传代的泪腺上皮细胞作空白对照.培养24 h后,再分别加入终浓度为100μmol/L H2O2于不同浓度丙酸睾酮组继续培养60 min,另以未加丙酸睾酮的DMEM/F12培养液培养的同期传代的泪腺上皮细胞作对照.③实验评估:应用TUNEL法检测泪腺上皮细胞凋亡,采用免疫细胞化学法检测泪腺上皮细胞Bax和Bcl-2表达.结果:①丙酸睾酮对过氧化氢诱导的泪腺上皮细胞凋亡的影响:与单纯加入100 μmol/L H2O2组比较,加入不同浓度丙酸睾酮组泪腺上皮细胞凋亡率均明显下降且丙酸睾酮的抗凋亡作用呈现一定范围内的剂量依赖性[(15.15±1.05)%,(13.94±0.73)%,(12.51±0.91)%,(10.63±0.78)%,(8.19±0.85)%,P＜0.01].②免疫细胞化学法检测Bcl-2和Bax蛋白表达:与单纯加100 μmol/L H2O2组相比较,同时加入1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙酸睾酮各组均可使泪腺上皮细胞Bcl-2的表达明显增强和Bax的表达明显减弱,且与丙酸睾酮的剂量呈正相关(Bcl-2:0.92±0.10,1.01±0.08,1.12±0.06,1.24±0.12,1.37±0.11;Bax:2.28±0.09,2.17±0.11,2.06±0.07,1.91±0.13,1.77±0.10,P＜0.01).结论:丙酸睾酮抑制泪腺上皮细胞凋亡的机制可能与凋亡调节相关基因Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.
目的:分析丙痠睪酮抑製淚腺上皮細胞凋亡的機製,為榦眼癥的性激素防治提供科學的理論依據.方法:實驗于2003-09/2004-01在重慶醫科大學附屬第一醫院中心實驗室完成.①實驗材料:二三月齡新西蘭健康白色傢兔30隻,無眼疾,雌性,體質量1.5～2.5 kg.丙痠睪酮(產品批號:020902,上海通用藥業股份有限公司產品),用DMSO配成儲存液,-70℃保存.分析純過氧化氫購自北方同正生物技術髮展有限公司.②實驗方法:經耳緣靜脈註射空氣處死傢兔,按常規無菌操作行淚腺摘除術,酶消化法分離兔淚腺上皮細胞.取二三代培養的淚腺上皮細胞,按約1×108 L-1密度接種于預置小玻片的24孔闆內,培養4 d後,加入濃度為1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙痠睪酮,繼續培養24 h,另以未加丙痠睪酮的培養液培養的同期傳代的淚腺上皮細胞作空白對照.培養24 h後,再分彆加入終濃度為100μmol/L H2O2于不同濃度丙痠睪酮組繼續培養60 min,另以未加丙痠睪酮的DMEM/F12培養液培養的同期傳代的淚腺上皮細胞作對照.③實驗評估:應用TUNEL法檢測淚腺上皮細胞凋亡,採用免疫細胞化學法檢測淚腺上皮細胞Bax和Bcl-2錶達.結果:①丙痠睪酮對過氧化氫誘導的淚腺上皮細胞凋亡的影響:與單純加入100 μmol/L H2O2組比較,加入不同濃度丙痠睪酮組淚腺上皮細胞凋亡率均明顯下降且丙痠睪酮的抗凋亡作用呈現一定範圍內的劑量依賴性[(15.15±1.05)%,(13.94±0.73)%,(12.51±0.91)%,(10.63±0.78)%,(8.19±0.85)%,P＜0.01].②免疫細胞化學法檢測Bcl-2和Bax蛋白錶達:與單純加100 μmol/L H2O2組相比較,同時加入1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L丙痠睪酮各組均可使淚腺上皮細胞Bcl-2的錶達明顯增彊和Bax的錶達明顯減弱,且與丙痠睪酮的劑量呈正相關(Bcl-2:0.92±0.10,1.01±0.08,1.12±0.06,1.24±0.12,1.37±0.11;Bax:2.28±0.09,2.17±0.11,2.06±0.07,1.91±0.13,1.77±0.10,P＜0.01).結論:丙痠睪酮抑製淚腺上皮細胞凋亡的機製可能與凋亡調節相關基因Bcl-2錶達上調和Bax錶達下調有關.
목적:분석병산고동억제루선상피세포조망적궤제,위간안증적성격소방치제공과학적이론의거.방법:실험우2003-09/2004-01재중경의과대학부속제일의원중심실험실완성.①실험재료:이삼월령신서란건강백색가토30지,무안질,자성,체질량1.5～2.5 kg.병산고동(산품비호:020902,상해통용약업고빈유한공사산품),용DMSO배성저존액,-70℃보존.분석순과양화경구자북방동정생물기술발전유한공사.②실험방법:경이연정맥주사공기처사가토,안상규무균조작행루선적제술,매소화법분리토루선상피세포.취이삼대배양적루선상피세포,안약1×108 L-1밀도접충우예치소파편적24공판내,배양4 d후,가입농도위1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L병산고동,계속배양24 h,령이미가병산고동적배양액배양적동기전대적루선상피세포작공백대조.배양24 h후,재분별가입종농도위100μmol/L H2O2우불동농도병산고동조계속배양60 min,령이미가병산고동적DMEM/F12배양액배양적동기전대적루선상피세포작대조.③실험평고:응용TUNEL법검측루선상피세포조망,채용면역세포화학법검측루선상피세포Bax화Bcl-2표체.결과:①병산고동대과양화경유도적루선상피세포조망적영향:여단순가입100 μmol/L H2O2조비교,가입불동농도병산고동조루선상피세포조망솔균명현하강차병산고동적항조망작용정현일정범위내적제량의뢰성[(15.15±1.05)%,(13.94±0.73)%,(12.51±0.91)%,(10.63±0.78)%,(8.19±0.85)%,P＜0.01].②면역세포화학법검측Bcl-2화Bax단백표체:여단순가100 μmol/L H2O2조상비교,동시가입1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L병산고동각조균가사루선상피세포Bcl-2적표체명현증강화Bax적표체명현감약,차여병산고동적제량정정상관(Bcl-2:0.92±0.10,1.01±0.08,1.12±0.06,1.24±0.12,1.37±0.11;Bax:2.28±0.09,2.17±0.11,2.06±0.07,1.91±0.13,1.77±0.10,P＜0.01).결론:병산고동억제루선상피세포조망적궤제가능여조망조절상관기인Bcl-2표체상조화Bax표체하조유관.
