中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2008年
4期
312-315
,共4页
谭峰%沙丹%李丽宁%潘长旺%黄慧聪%梁韶晖%诸葛青云%秦茜
譚峰%沙丹%李麗寧%潘長旺%黃慧聰%樑韶暉%諸葛青雲%秦茜
담봉%사단%리려저%반장왕%황혜총%량소휘%제갈청운%진천
弓形虫RH株%速殖子%三磷酸核苷水解酶-II%原核表达%间接ELISA
弓形蟲RH株%速殖子%三燐痠覈苷水解酶-II%原覈錶達%間接ELISA
궁형충RH주%속식자%삼린산핵감수해매-II%원핵표체%간접ELISA
目的 探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用.方法 通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达.SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物.用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-II抗体的间接ELISA方法.结果 PCR扩增得到特异的弓形虫NTPase-II基因序列,经测序鉴定无基因突变.重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符.经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体.具有良好的抗原性和免疫原性.用表达的重组NTPase-II蛋白初步建立了用于NTPase-II抗体检测的间接ELISA方法.结论 重组NTPase-II蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发.
目的 探討弓形蟲RH株速殖子NTPase-II重組蛋白的免疫反應性及其在抗體檢測中的應用.方法 通過PCR穫得NTPase-II基因,剋隆入pGEM-T Easy載體,經酶切與測序鑒定後亞剋隆至錶達質粒pBAD-HisB,構建原覈錶達重組質粒,在大腸桿菌中以包涵體形式穫得高效錶達.SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白錶達產物.用純化的錶達產物作為診斷抗原,通過對反應條件的優化,初步建立檢測抗NTPase-II抗體的間接ELISA方法.結果 PCR擴增得到特異的弓形蟲NTPase-II基因序列,經測序鑒定無基因突變.重組質粒誘導錶達產物相對分子量約70kD,與理論值相符.經Western-blot證實,重組蛋白可刺激機體產生相應的抗體.具有良好的抗原性和免疫原性.用錶達的重組NTPase-II蛋白初步建立瞭用于NTPase-II抗體檢測的間接ELISA方法.結論 重組NTPase-II蛋白具有較彊免疫原性,可作為診斷抗原用于急性弓形蟲感染診斷試劑的研髮.
목적 탐토궁형충RH주속식자NTPase-II중조단백적면역반응성급기재항체검측중적응용.방법 통과PCR획득NTPase-II기인,극륭입pGEM-T Easy재체,경매절여측서감정후아극륭지표체질립pBAD-HisB,구건원핵표체중조질립,재대장간균중이포함체형식획득고효표체.SDS-PAGE화Western-blot분석단백표체산물.용순화적표체산물작위진단항원,통과대반응조건적우화,초보건립검측항NTPase-II항체적간접ELISA방법.결과 PCR확증득도특이적궁형충NTPase-II기인서렬,경측서감정무기인돌변.중조질립유도표체산물상대분자량약70kD,여이론치상부.경Western-blot증실,중조단백가자격궤체산생상응적항체.구유량호적항원성화면역원성.용표체적중조NTPase-II단백초보건립료용우NTPase-II항체검측적간접ELISA방법.결론 중조NTPase-II단백구유교강면역원성,가작위진단항원용우급성궁형충감염진단시제적연발.
