CAJ | 학술논문

获得稳定、高效的具有良好抗原性的蓝舌病毒(Bluetongue virus,BTV)vp7基因重组抗原.将BTV编码群特异性抗原VP7的S7基因片段克隆至pMD18-T质粒载体中,构建S7克隆重组质粒,进行核苷酸序列分析.与已报道的多株BTV编码VP7的基因比较后发现,所测定毒株的核苷酸序列与BTV10型的S7基因同源性高达98.7%,推测的氨基酸同源性为99.3%,证实为BTV的S7基因.然后亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体,转化LGM194细胞,经抗性培养、PCR、限制性内切酶分析、测序鉴定,筛选获得BTV S7基因片段正向插入、有正确读码框的阳性克隆,成功构建了BTV群特异性抗原VP7的重组表达载体.经L-araboinose诱导表达,可稳定、高效地表达VP7蛋白抗原.SDS-PAGE、ELISA试验表明,表达蛋白为融合蛋白,具有反应原性,分子量约54.5kD,重组蛋白的获得率为1.52mg/g湿菌,其表达产量约占菌体总蛋白的12%左右,相当于93.5mg/L菌液.融合蛋白中含有BTV VP7特异性蛋白抗原,可作为c-ELISA包被抗原,为蓝舌病的免疫血清学诊断试剂的制备和分子生物学研究打下了坚实基础.
획득은정、고효적구유량호항원성적람설병독(Bluetongue virus,BTV)vp7기인중조항원.장BTV편마군특이성항원VP7적S7기인편단극륭지pMD18-T질립재체중,구건S7극륭중조질립,진행핵감산서렬분석.여이보도적다주BTV편마VP7적기인비교후발현,소측정독주적핵감산서렬여BTV10형적S7기인동원성고체98.7%,추측적안기산동원성위99.3%,증실위BTV적S7기인.연후아극륭삽입pBAD/ThioTOPO표체재체,전화LGM194세포,경항성배양、PCR、한제성내절매분석、측서감정,사선획득BTV S7기인편단정향삽입、유정학독마광적양성극륭,성공구건료BTV군특이성항원VP7적중조표체재체.경L-araboinose유도표체,가은정、고효지표체VP7단백항원.SDS-PAGE、ELISA시험표명,표체단백위융합단백,구유반응원성,분자량약54.5kD,중조단백적획득솔위1.52mg/g습균,기표체산량약점균체총단백적12%좌우,상당우93.5mg/L균액.융합단백중함유BTV VP7특이성단백항원,가작위c-ELISA포피항원,위람설병적면역혈청학진단시제적제비화분자생물학연구타하료견실기출.