山东大学学报（医学版）
山東大學學報（醫學版）
산동대학학보（의학판）
JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2008年
2期
128-131
,共4页
孙慧%龚磊%刘斌%杨亚培%徐春晓%刘贤锡
孫慧%龔磊%劉斌%楊亞培%徐春曉%劉賢錫
손혜%공뢰%류빈%양아배%서춘효%류현석
精眯%精胺N1乙酰基转移酶%原核表达%结直肠肿瘤
精瞇%精胺N1乙酰基轉移酶%原覈錶達%結直腸腫瘤
정미%정알N1을선기전이매%원핵표체%결직장종류
目的 构建人精眯,精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白.方法 从大肠癌组织中提取总BNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTnEx-4-SSAT.将重组表达质粒转化入E.coli JM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白.结果 酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20kD的外源蛋白.Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白.结论 成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具.
目的 構建人精瞇,精胺N1乙酰基轉移酶基因的原覈錶達載體,誘導該質粒在大腸桿菌中錶達併純化其錶達的重組蛋白.方法 從大腸癌組織中提取總BNA,採用RT-PCR法擴增人SSAT基因的cDNA片段,經TA剋隆及亞剋隆方法構建原覈錶達載體pTnEx-4-SSAT.將重組錶達質粒轉化入E.coli JM109(DE3)中,經IPTG誘導錶達,SDS-PAGE電泳和Western blot鑒定錶達蛋白,併通過6His-tag,利用親和層析法純化錶達的融閤蛋白.結果 酶切鑒定和DNA測序顯示,人SSAT的cDNA片段成功插入錶達載體pTriEx-4中,而且方嚮正確,SDS-PAGE電泳顯示錶達齣20kD的外源蛋白.Western blot檢測結果顯示,錶達齣的蛋白為6His-tag的融閤蛋白,而且用Ni-NTA親和層析法純化瞭該重組蛋白.結論 成功構建、錶達和純化瞭重組SSAT蛋白,為製備其抗體及研究該基因與結直腸腫瘤的關繫提供瞭有力的工具.
목적 구건인정미,정알N1을선기전이매기인적원핵표체재체,유도해질립재대장간균중표체병순화기표체적중조단백.방법 종대장암조직중제취총BNA,채용RT-PCR법확증인SSAT기인적cDNA편단,경TA극륭급아극륭방법구건원핵표체재체pTnEx-4-SSAT.장중조표체질립전화입E.coli JM109(DE3)중,경IPTG유도표체,SDS-PAGE전영화Western blot감정표체단백,병통과6His-tag,이용친화층석법순화표체적융합단백.결과 매절감정화DNA측서현시,인SSAT적cDNA편단성공삽입표체재체pTriEx-4중,이차방향정학,SDS-PAGE전영현시표체출20kD적외원단백.Western blot검측결과현시,표체출적단백위6His-tag적융합단백,이차용Ni-NTA친화층석법순화료해중조단백.결론 성공구건、표체화순화료중조SSAT단백,위제비기항체급연구해기인여결직장종류적관계제공료유력적공구.
