CAJ | 학술논문

背景与目的:探索肝癌细胞的突变基因产物--具有潜在抗原性的异常蛋白质而无法形成有效免疫原的机理,寻找肝癌的特异性抗原,并在此基础上研制出治疗肝癌的DNA疫苗将对肝癌的免疫学治疗产生积极的影响.本实验构建BALB/c小鼠具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉信号肽的AFP2cDNA真核表达载体,分别在小鼠树突细胞(dendritic cells,DCs)中表达,并观察其在体外抗肝癌免疫中的作用.方法:采用RT-PCR方法自小鼠肝癌细胞株H22中扩增出具有分泌性信号肽的AFP1cDNA和去掉分泌性信号肽的AFP2cDNA,将该基因定向插入真核表达载体PEGF-N3中;同时培养经rmGM-CSF、rmIL-4诱导的小鼠骨髓细胞,体外获取大量DCs,脂质体转染PEGF-N3/AFPi、PEGF-N3/AFP2至DCs进行表达、鉴定.将DCs疫苗与同源小鼠脾淋巴细胞混合培养,ELISA方法测定脾细胞γ-干扰素(IFN-γ)分泌活性,51Cr释放法测定脾淋巴细胞的特异性杀伤活性.结果:从H22中克隆到AFP1cDNA和AFP2 cDNA,经测序完全正确,所构建的真核表达质粒PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2在小鼠DCs中获得稳定高效表达,其中PEGF-N3/AFP2明显刺激T细胞增殖,刺激指数(SI)为5.12±1.46,明显高于空质粒组(1.42±0.73).AFP2/DC疫苗对H22细胞的特异性杀伤活性[(88.15±16.47)%]明显高于空质粒组[(12.72±5.45)%].结论:成功地构建了真核表达载体PEGF-N3/AFP1和PEGF-N3/AFP2,编码去掉分泌性信号肽的PEGF-N3/AFP2转染的DC,能够诱导较强的特异性抗肝癌免疫效应.其机制可能为诱导肝癌细胞凋亡.
배경여목적:탐색간암세포적돌변기인산물--구유잠재항원성적이상단백질이무법형성유효면역원적궤리,심조간암적특이성항원,병재차기출상연제출치료간암적DNA역묘장대간암적면역학치료산생적겁적영향.본실험구건BALB/c소서구유분비성신호태적AFP1cDNA화거도신호태적AFP2cDNA진핵표체재체,분별재소서수돌세포(dendritic cells,DCs)중표체,병관찰기재체외항간암면역중적작용.방법:채용RT-PCR방법자소서간암세포주H22중확증출구유분비성신호태적AFP1cDNA화거도분비성신호태적AFP2cDNA,장해기인정향삽입진핵표체재체PEGF-N3중;동시배양경rmGM-CSF、rmIL-4유도적소서골수세포,체외획취대량DCs,지질체전염PEGF-N3/AFPi、PEGF-N3/AFP2지DCs진행표체、감정.장DCs역묘여동원소서비림파세포혼합배양,ELISA방법측정비세포γ-간우소(IFN-γ)분비활성,51Cr석방법측정비림파세포적특이성살상활성.결과:종H22중극륭도AFP1cDNA화AFP2 cDNA,경측서완전정학,소구건적진핵표체질립PEGF-N3/AFP1화PEGF-N3/AFP2재소서DCs중획득은정고효표체,기중PEGF-N3/AFP2명현자격T세포증식,자격지수(SI)위5.12±1.46,명현고우공질립조(1.42±0.73).AFP2/DC역묘대H22세포적특이성살상활성[(88.15±16.47)%]명현고우공질립조[(12.72±5.45)%].결론:성공지구건료진핵표체재체PEGF-N3/AFP1화PEGF-N3/AFP2,편마거도분비성신호태적PEGF-N3/AFP2전염적DC,능구유도교강적특이성항간암면역효응.기궤제가능위유도간암세포조망.