福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
5期
431-435
,共5页
朱雄鹏%陈志哲%林旭%胡建达%李纯团%许贞书%杨婷
硃雄鵬%陳誌哲%林旭%鬍建達%李純糰%許貞書%楊婷
주웅붕%진지철%림욱%호건체%리순단%허정서%양정
腺病毒科,载体%遗传%粒细胞巨噬细胞集落刺激因子%树突细胞
腺病毒科,載體%遺傳%粒細胞巨噬細胞集落刺激因子%樹突細胞
선병독과,재체%유전%립세포거서세포집락자격인자%수돌세포
目的 构建人GM-CSF基因的重组腺病毒载体,探讨其在树突状细胞(DC)中的表达.方法 设计一对GM-CSF基因上下游引物,以质粒pBlu-hGM-CSF为模板,经PCR扩增获得GM-CSF基因全部序列.片段回收后经酶切,定向插入腺病毒穿梭质粒,获得重组质粒pshuttle-CMV-GM-CSF.经双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体转化包含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒,将2种重组腺病毒质粒分别进行酶切、线性化、纯化,用脂质体转染293细胞.制备病毒上清并测定其滴度,并感染人树突状细胞.结果 完成构建含有人GM-CSF基因的重组腺病毒,病毒滴度Ad-GM-CSF 5.2×109pfu/mL.RT-PCR及ELISA检测证实GM-CSF在DC中表达.结论 构建重组腺病毒载体,并在DC表达GM-CSF抗原蛋白.
目的 構建人GM-CSF基因的重組腺病毒載體,探討其在樹突狀細胞(DC)中的錶達.方法 設計一對GM-CSF基因上下遊引物,以質粒pBlu-hGM-CSF為模闆,經PCR擴增穫得GM-CSF基因全部序列.片段迴收後經酶切,定嚮插入腺病毒穿梭質粒,穫得重組質粒pshuttle-CMV-GM-CSF.經雙酶切、PCR及插入片段測序鑒定後,將正確重組體轉化包含腺病毒骨架質粒pAdEasy-1的BJ5183菌.同源重組後用選擇性培養基篩選暘性剋隆,提取質粒,將2種重組腺病毒質粒分彆進行酶切、線性化、純化,用脂質體轉染293細胞.製備病毒上清併測定其滴度,併感染人樹突狀細胞.結果 完成構建含有人GM-CSF基因的重組腺病毒,病毒滴度Ad-GM-CSF 5.2×109pfu/mL.RT-PCR及ELISA檢測證實GM-CSF在DC中錶達.結論 構建重組腺病毒載體,併在DC錶達GM-CSF抗原蛋白.
목적 구건인GM-CSF기인적중조선병독재체,탐토기재수돌상세포(DC)중적표체.방법 설계일대GM-CSF기인상하유인물,이질립pBlu-hGM-CSF위모판,경PCR확증획득GM-CSF기인전부서렬.편단회수후경매절,정향삽입선병독천사질립,획득중조질립pshuttle-CMV-GM-CSF.경쌍매절、PCR급삽입편단측서감정후,장정학중조체전화포함선병독골가질립pAdEasy-1적BJ5183균.동원중조후용선택성배양기사선양성극륭,제취질립,장2충중조선병독질립분별진행매절、선성화、순화,용지질체전염293세포.제비병독상청병측정기적도,병감염인수돌상세포.결과 완성구건함유인GM-CSF기인적중조선병독,병독적도Ad-GM-CSF 5.2×109pfu/mL.RT-PCR급ELISA검측증실GM-CSF재DC중표체.결론 구건중조선병독재체,병재DC표체GM-CSF항원단백.
