中国农业大学学报
中國農業大學學報
중국농업대학학보
JOURNAL OF CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2007年
5期
5-9
,共5页
唐秀山%王磊%廖定为%蒋一男%夏春
唐秀山%王磊%廖定為%蔣一男%夏春
당수산%왕뢰%료정위%장일남%하춘
鸡%CD8α%CD8β%原核表达%多克隆抗体
鷄%CD8α%CD8β%原覈錶達%多剋隆抗體
계%CD8α%CD8β%원핵표체%다극륭항체
为了获得鸡CD8α/β蛋白及其多克隆抗体,进一步研究其结构与功能,本实验从三黄鸡cDNA文库中克隆了其CD8α/β胞外区片段,构建了pQE30/ChCD8α/β原核表达系统,并经诱导表达、亲和层析纯化,获得了纯化的重组蛋白(rChCD8α/β),然后用rChCD8α/β分别免疫Balb/c小鼠制备了其多克隆抗体.结果表明:本实验克隆的ChCD8α长483 bp、编码161个氨基酸、可在E.coli JM109 中高效表达,蛋白质分子质量为24.0 ku,表达量占菌体蛋白量的25.0%,由该蛋白质所制备的多克隆抗体抗rChCD8α的ELISA效价为1∶1 024 000;另外,克隆的ChCD8β长447 bp, 编码149个氨基酸,蛋白质的分子质量为18.5 ku,表达量占菌体蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多克隆抗体ELISA效价为1∶64 000.本实验所得鸡CD8α/β的多克隆抗体将用于四聚体研究.
為瞭穫得鷄CD8α/β蛋白及其多剋隆抗體,進一步研究其結構與功能,本實驗從三黃鷄cDNA文庫中剋隆瞭其CD8α/β胞外區片段,構建瞭pQE30/ChCD8α/β原覈錶達繫統,併經誘導錶達、親和層析純化,穫得瞭純化的重組蛋白(rChCD8α/β),然後用rChCD8α/β分彆免疫Balb/c小鼠製備瞭其多剋隆抗體.結果錶明:本實驗剋隆的ChCD8α長483 bp、編碼161箇氨基痠、可在E.coli JM109 中高效錶達,蛋白質分子質量為24.0 ku,錶達量佔菌體蛋白量的25.0%,由該蛋白質所製備的多剋隆抗體抗rChCD8α的ELISA效價為1∶1 024 000;另外,剋隆的ChCD8β長447 bp, 編碼149箇氨基痠,蛋白質的分子質量為18.5 ku,錶達量佔菌體蛋白量的20.0%,抗rChCD8β多剋隆抗體ELISA效價為1∶64 000.本實驗所得鷄CD8α/β的多剋隆抗體將用于四聚體研究.
위료획득계CD8α/β단백급기다극륭항체,진일보연구기결구여공능,본실험종삼황계cDNA문고중극륭료기CD8α/β포외구편단,구건료pQE30/ChCD8α/β원핵표체계통,병경유도표체、친화층석순화,획득료순화적중조단백(rChCD8α/β),연후용rChCD8α/β분별면역Balb/c소서제비료기다극륭항체.결과표명:본실험극륭적ChCD8α장483 bp、편마161개안기산、가재E.coli JM109 중고효표체,단백질분자질량위24.0 ku,표체량점균체단백량적25.0%,유해단백질소제비적다극륭항체항rChCD8α적ELISA효개위1∶1 024 000;령외,극륭적ChCD8β장447 bp, 편마149개안기산,단백질적분자질량위18.5 ku,표체량점균체단백량적20.0%,항rChCD8β다극륭항체ELISA효개위1∶64 000.본실험소득계CD8α/β적다극륭항체장용우사취체연구.
