农业生物技术学报
農業生物技術學報
농업생물기술학보
JOURNAL OF AGRICULTURAL BIOTECHNOLOGY
2008年
2期
341-345
,共5页
黄天培%潘洁茹%黄张敏%陈志%庄浩瀚%李今煜%关雄
黃天培%潘潔茹%黃張敏%陳誌%莊浩瀚%李今煜%關雄
황천배%반길여%황장민%진지%장호한%리금욱%관웅
苏云金芽胞杆菌%cry2Ac基因%克隆%表达%杀虫活性
囌雲金芽胞桿菌%cry2Ac基因%剋隆%錶達%殺蟲活性
소운금아포간균%cry2Ac기인%극륭%표체%살충활성
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)WB9是我国分离自武夷山的对多种重要农业害虫具有高毒力的菌株,经PCR-RFLP鉴定含有cry2Ac基因.根据cry2基因序列设计引物,以WB9质粒为模板扩增cry2Ac全长基因,与大肠杆菌(Es-chetichia cob)克隆载体pMD18-T连接获得含有cry2Ac全长基因的重组质粒pMD2Ac并测序.该基因在GenBank登录号为DQ361267.被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ac4.通过亚克隆方法将cry2Ac4基因插入穿梭表达载体pHT315获得重组表达质粒pHT2Ac,将其转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73 Cry,得到的工程菌能正常表达70 kD蛋白,形成方形晶体.生物测定结果表明,cry2Ae4基因表达产物对桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel)幼虫具有显著的毒杀作用,但对小菜蛾(Plutella xylostella)和致倦库蚊(Culex quinquefasciatus)幼虫基本没有效果.
囌雲金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,Bt)WB9是我國分離自武夷山的對多種重要農業害蟲具有高毒力的菌株,經PCR-RFLP鑒定含有cry2Ac基因.根據cry2基因序列設計引物,以WB9質粒為模闆擴增cry2Ac全長基因,與大腸桿菌(Es-chetichia cob)剋隆載體pMD18-T連接穫得含有cry2Ac全長基因的重組質粒pMD2Ac併測序.該基因在GenBank登錄號為DQ361267.被Bt國際命名委員會正式命名為cry2Ac4.通過亞剋隆方法將cry2Ac4基因插入穿梭錶達載體pHT315穫得重組錶達質粒pHT2Ac,將其轉化大腸桿菌SCS110和Bt無晶體突變株HD73 Cry,得到的工程菌能正常錶達70 kD蛋白,形成方形晶體.生物測定結果錶明,cry2Ae4基因錶達產物對桔小實蠅(Bactrocera dorsalis Hendel)幼蟲具有顯著的毒殺作用,但對小菜蛾(Plutella xylostella)和緻倦庫蚊(Culex quinquefasciatus)幼蟲基本沒有效果.
소운금아포간균(Bacillus thuringiensis,Bt)WB9시아국분리자무이산적대다충중요농업해충구유고독력적균주,경PCR-RFLP감정함유cry2Ac기인.근거cry2기인서렬설계인물,이WB9질립위모판확증cry2Ac전장기인,여대장간균(Es-chetichia cob)극륭재체pMD18-T련접획득함유cry2Ac전장기인적중조질립pMD2Ac병측서.해기인재GenBank등록호위DQ361267.피Bt국제명명위원회정식명명위cry2Ac4.통과아극륭방법장cry2Ac4기인삽입천사표체재체pHT315획득중조표체질립pHT2Ac,장기전화대장간균SCS110화Bt무정체돌변주HD73 Cry,득도적공정균능정상표체70 kD단백,형성방형정체.생물측정결과표명,cry2Ae4기인표체산물대길소실승(Bactrocera dorsalis Hendel)유충구유현저적독살작용,단대소채아(Plutella xylostella)화치권고문(Culex quinquefasciatus)유충기본몰유효과.
