南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2008年
4期
429-433
,共5页
Livin%RNA干扰%SGC-7901细胞%基因
Livin%RNA榦擾%SGC-7901細胞%基因
Livin%RNA간우%SGC-7901세포%기인
目的:构建以Livin基因为靶基因的siRNA表达载体pGPU6/GFP/Neo/Livin,获得稳定沉默Livin基因的胃癌细胞SGC-7901/siRNA-Livin.方法:化学合成siRNA,Livin寡核苷酸,将其分别克隆进载体pGPU6/GFP/Neo,进行核酸序列测定.脂质体法转染SGC-7901细胞,半定量RT-PCR和Western blot检测Livin基因在SGC-7901细胞中的沉默效率,G418筛选获得稳定转染的细胞克隆.结果:酶切分析显示,所有质粒均为阳性重组载体,核酸测序表明合成的序列准确插入pGPU6/GFP/Neo载体,G418筛选基因转染SGC-7901细胞后形成稳定克隆.其中pGPU6/GFP/Neo/Livin-4转染后Livin mRNA沉默效率大于70%.结论:成功获得Livin特异性siRNA表达载体,SGC-7901细胞Livin基因的表达受到抑制,转染胃癌细胞后获得SGC-7901/siRNA-Livin细胞克隆.
目的:構建以Livin基因為靶基因的siRNA錶達載體pGPU6/GFP/Neo/Livin,穫得穩定沉默Livin基因的胃癌細胞SGC-7901/siRNA-Livin.方法:化學閤成siRNA,Livin寡覈苷痠,將其分彆剋隆進載體pGPU6/GFP/Neo,進行覈痠序列測定.脂質體法轉染SGC-7901細胞,半定量RT-PCR和Western blot檢測Livin基因在SGC-7901細胞中的沉默效率,G418篩選穫得穩定轉染的細胞剋隆.結果:酶切分析顯示,所有質粒均為暘性重組載體,覈痠測序錶明閤成的序列準確插入pGPU6/GFP/Neo載體,G418篩選基因轉染SGC-7901細胞後形成穩定剋隆.其中pGPU6/GFP/Neo/Livin-4轉染後Livin mRNA沉默效率大于70%.結論:成功穫得Livin特異性siRNA錶達載體,SGC-7901細胞Livin基因的錶達受到抑製,轉染胃癌細胞後穫得SGC-7901/siRNA-Livin細胞剋隆.
목적:구건이Livin기인위파기인적siRNA표체재체pGPU6/GFP/Neo/Livin,획득은정침묵Livin기인적위암세포SGC-7901/siRNA-Livin.방법:화학합성siRNA,Livin과핵감산,장기분별극륭진재체pGPU6/GFP/Neo,진행핵산서렬측정.지질체법전염SGC-7901세포,반정량RT-PCR화Western blot검측Livin기인재SGC-7901세포중적침묵효솔,G418사선획득은정전염적세포극륭.결과:매절분석현시,소유질립균위양성중조재체,핵산측서표명합성적서렬준학삽입pGPU6/GFP/Neo재체,G418사선기인전염SGC-7901세포후형성은정극륭.기중pGPU6/GFP/Neo/Livin-4전염후Livin mRNA침묵효솔대우70%.결론:성공획득Livin특이성siRNA표체재체,SGC-7901세포Livin기인적표체수도억제,전염위암세포후획득SGC-7901/siRNA-Livin세포극륭.
