CAJ | 학술논문

火鸡疱疹病毒(HVT)为一种-疱疹病毒,因其与马立克氏病病毒(MDV)抗原相关性而被广泛用作预防马立克氏病(MD)的活疫苗.[目的]本研究的目的是构建HVT全基因组感染性细菌人工染色体(BAC).[方法]利用Eco-gpt(黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶)基因和BAC载体pBeloBAC11的基本功能序列,构建重组病毒转移载体Pgab-gpt-BAC11.通过将Pgab-gpt-BAC11与HVT感染细胞总DNA共转染原代鸡胚成纤维细胞(CEF),待出现病毒噬斑后,利用霉酚酸(MPA)阻断核酸代谢途径,经过筛选获得纯化的重组病毒purified-Rhvt.提取purified-Rhvt感染细胞总DNA电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,在氯霉素抗性平板上筛选阳性克隆,并用酶切和PCR方法对其进行鉴定.随机选取BAC克隆提取BAC DNA转染次代CEF,完成HVT重组病毒的拯救.[结果]经过6轮筛选后获得纯化的重组病毒,并筛选到25个BAC分子克隆化病毒.其中BAC6、BAC8和BAC10再次启动病毒感染,产生与野生型HVT感染CEF相似的病毒噬斑形态,说明已经获得拯救出的HVT重组病毒.[结论]本研究构建了HVT全基因组感染性细菌人工染色体,建立了HVT反向遗传操作技术平台.
화계포진병독(HVT)위일충-포진병독,인기여마립극씨병병독(MDV)항원상관성이피엄범용작예방마립극씨병(MD)적활역묘.[목적]본연구적목적시구건HVT전기인조감염성세균인공염색체(BAC).[방법]이용Eco-gpt(황표령조표령린산핵당전이매)기인화BAC재체pBeloBAC11적기본공능서렬,구건중조병독전이재체Pgab-gpt-BAC11.통과장Pgab-gpt-BAC11여HVT감염세포총DNA공전염원대계배성섬유세포(CEF),대출현병독서반후,이용매분산(MPA)조단핵산대사도경,경과사선획득순화적중조병독purified-Rhvt.제취purified-Rhvt감염세포총DNA전전화대장간균DH10B감수태세포,재록매소항성평판상사선양성극륭,병용매절화PCR방법대기진행감정.수궤선취BAC극륭제취BAC DNA전염차대CEF,완성HVT중조병독적증구.[결과]경과6륜사선후획득순화적중조병독,병사선도25개BAC분자극륭화병독.기중BAC6、BAC8화BAC10재차계동병독감염,산생여야생형HVT감염CEF상사적병독서반형태,설명이경획득증구출적HVT중조병독.[결론]본연구구건료HVT전기인조감염성세균인공염색체,건립료HVT반향유전조작기술평태.