CAJ | 학술논문

目的:研究短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对人胰腺癌细胞PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用.方法:构建特异性针对胰腺癌PANC-1细胞突变型K-ras基因的重组质粒pGensil-1-P1,阴性对照质粒pGensil-1-HK并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测K-ras基因mRNA和蛋白的表达,CCK-8方法测量细胞生长曲线.并建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠皮下移植瘤模型,分别注射Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK质粒,动态观察并处死裸鼠计算肿瘤体积.结果:测序证实质粒表达载体构建成功,短发夹RNA(shRNA)使胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因的mRNA较未治疗组、阴性对照组相比明显减少(P=0.01);未治疗组、阴性对照组及治疗组的K-ras蛋白表达率分别为100%,99.0%±0.73%,39.9%±2.1%,前两组K-ras蛋白表达差异无统计学意义,治疗组较未治疗组K-ras蛋白表达下调了约60.1%;细胞生长受到明显抑制(P=0.02);经重组质粒治疗14 d后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相较于对照组瘤体明显缩小(P=0.03).结论:shRNA对特异性转染组的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用,使细胞以及裸鼠移植瘤的生长受到抑制.
목적:연구단발협RNA(short hairpin RNA,shRNA)대인이선암세포PANC-1중돌변형K-ras기인표체적억제작용.방법:구건특이성침대이선암PANC-1세포돌변형K-ras기인적중조질립pGensil-1-P1,음성대조질립pGensil-1-HK병채용지질체개도적방법전염이선암세포.응용역전록취합매련반응(RT-PCR)화단백면역인적(Western blot)검측K-ras기인mRNA화단백적표체,CCK-8방법측량세포생장곡선.병건립인이선암세포PANC-1라서피하이식류모형,분별주사Pgenesil-1-P1、Pgenesil-1-HK질립,동태관찰병처사라서계산종류체적.결과:측서증실질립표체재체구건성공,단발협RNA(shRNA)사이선암세포PANC-1돌변형K-ras기인적mRNA교미치료조、음성대조조상비명현감소(P=0.01);미치료조、음성대조조급치료조적K-ras단백표체솔분별위100%,99.0%±0.73%,39.9%±2.1%,전량조K-ras단백표체차이무통계학의의,치료조교미치료조K-ras단백표체하조료약60.1%;세포생장수도명현억제(P=0.02);경중조질립치료14 d후,라서피하이식류생장완만,상교우대조조류체명현축소(P=0.03).결론:shRNA대특이성전염조적이선암세포적돌변K-ras기인표체유억제작용,사세포이급라서이식류적생장수도억제.