浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2009年
3期
276-282
,共7页
樊欢%孙爱华%夏肖萍%孙琦%严杰
樊歡%孫愛華%夏肖萍%孫琦%嚴傑
번환%손애화%하초평%손기%엄걸
链球菌,肺炎/遗传学%聚合酶链反应%信号传导%β内酰胺酶类%抗药性,细菌%基因表达%重组蛋白质类%基因表达调控,细菌
鏈毬菌,肺炎/遺傳學%聚閤酶鏈反應%信號傳導%β內酰胺酶類%抗藥性,細菌%基因錶達%重組蛋白質類%基因錶達調控,細菌
련구균,폐염/유전학%취합매련반응%신호전도%β내선알매류%항약성,세균%기인표체%중조단백질류%기인표체조공,세균
目的:构建肺炎链球菌调控感受态形成的二元信号传导系统(TCS)基因comD/comE/comC的原核表达系统,探讨ComD和ComC封闭后细菌耐药性变化.方法:采用PCR扩增全长comD、comE和comC基因,并用常规基因工程技术建立其原核表达系统.采用SDS-PAGE及Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rComD、rComE和rComC表达量.免疫家兔制备rComD、rComE和rComC抗血清.检测肺炎链球菌菌株ComD和ComC被抗血清封闭后对青霉素和头孢胺噻耐药性的变化.结果:与报道序列比较,所克隆的comD、comE和comC基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.4%～99.3%和99.1%～100%.所构建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coli BL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效表达目的重组蛋白rComD、rComE和rComC,其产量分别为细菌总蛋白的28%、25%和35%.rComD、rComE和rComC抗血清免疫双扩散效价分别为1∶4、1∶4和1∶8.ComD和/或ComC被抗血清封闭后,头孢胺噻敏感菌株可出现耐药性,但耐药菌株耐药性无明显改变,也不影响各菌株对青霉素的耐药性.结论:本研究成功地构建了肺炎链球菌comD/come/comC基因原核表达系统,为深入研究感受态形成相关TCS与耐药性关系奠定了基础.ComD和ComC与肺炎链球菌对头孢胺噻耐药性有关.
目的:構建肺炎鏈毬菌調控感受態形成的二元信號傳導繫統(TCS)基因comD/comE/comC的原覈錶達繫統,探討ComD和ComC封閉後細菌耐藥性變化.方法:採用PCR擴增全長comD、comE和comC基因,併用常規基因工程技術建立其原覈錶達繫統.採用SDS-PAGE及Bio-Rad凝膠圖像分析繫統檢測目的重組蛋白rComD、rComE和rComC錶達量.免疫傢兔製備rComD、rComE和rComC抗血清.檢測肺炎鏈毬菌菌株ComD和ComC被抗血清封閉後對青黴素和頭孢胺噻耐藥性的變化.結果:與報道序列比較,所剋隆的comD、comE和comC基因覈苷痠和氨基痠序列相似性分彆為98.4%～99.3%和99.1%～100%.所構建的工程菌E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coli BL21DE3pET42a-comE和E.coli BL21DE3pET32a-comC能有效錶達目的重組蛋白rComD、rComE和rComC,其產量分彆為細菌總蛋白的28%、25%和35%.rComD、rComE和rComC抗血清免疫雙擴散效價分彆為1∶4、1∶4和1∶8.ComD和/或ComC被抗血清封閉後,頭孢胺噻敏感菌株可齣現耐藥性,但耐藥菌株耐藥性無明顯改變,也不影響各菌株對青黴素的耐藥性.結論:本研究成功地構建瞭肺炎鏈毬菌comD/come/comC基因原覈錶達繫統,為深入研究感受態形成相關TCS與耐藥性關繫奠定瞭基礎.ComD和ComC與肺炎鏈毬菌對頭孢胺噻耐藥性有關.
목적:구건폐염련구균조공감수태형성적이원신호전도계통(TCS)기인comD/comE/comC적원핵표체계통,탐토ComD화ComC봉폐후세균내약성변화.방법:채용PCR확증전장comD、comE화comC기인,병용상규기인공정기술건립기원핵표체계통.채용SDS-PAGE급Bio-Rad응효도상분석계통검측목적중조단백rComD、rComE화rComC표체량.면역가토제비rComD、rComE화rComC항혈청.검측폐염련구균균주ComD화ComC피항혈청봉폐후대청매소화두포알새내약성적변화.결과:여보도서렬비교,소극륭적comD、comE화comC기인핵감산화안기산서렬상사성분별위98.4%～99.3%화99.1%～100%.소구건적공정균E.coli BL21DE3pET42a-comD、E.coli BL21DE3pET42a-comE화E.coli BL21DE3pET32a-comC능유효표체목적중조단백rComD、rComE화rComC,기산량분별위세균총단백적28%、25%화35%.rComD、rComE화rComC항혈청면역쌍확산효개분별위1∶4、1∶4화1∶8.ComD화/혹ComC피항혈청봉폐후,두포알새민감균주가출현내약성,단내약균주내약성무명현개변,야불영향각균주대청매소적내약성.결론:본연구성공지구건료폐염련구균comD/come/comC기인원핵표체계통,위심입연구감수태형성상관TCS여내약성관계전정료기출.ComD화ComC여폐염련구균대두포알새내약성유관.
