CAJ | 학술논문

目的:培养和鉴定大鼠内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs),观察pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染大鼠骨髓内皮祖细胞后内皮细胞生长因子165(Vascular endot-helial growth fator-165,VEGF165)的表达.方法:体外培养内皮祖细胞,以免疫细胞化学法检测其表面抗原(CD34、CD133、KDR)的表达.通过pcDNA3.1(+)质粒转染VEGF165后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测内皮祖细胞培养上清液中VEGF蛋白的水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内皮祖细胞中VEGF165mRNA的表达.结果:免疫细胞化学检测表明培养的细胞为大鼠内皮祖细胞,PCR后凝胶电泳显示pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组在576 bp处可见有明显条带,pcDNA3.1(+)空质粒转染组和未转染组可见微弱的电泳带位于500 bp与600 bp之间,约576bp大小.ELISA检测结果为pcDNA3.1(+)/VEGF165质粒转染组上清液中VEGF165水平为(175.8±10.7)pg/ml,pcDNA3.1(+)空质粒组为(10.5±1.6)pg/ml,未转染组为(9.3±1.3)pg/ml.结论:内皮祖细胞体外培养有微量VEGF165表达,应用pcDNA3.1(+)/VEGF165载体转染,可使SD大鼠内皮祖细胞高效表达VEGF165.
목적:배양화감정대서내피조세포(Endothelial progenitor cells,EPCs),관찰pcDNA3.1(+)/VEGF165질립전염대서골수내피조세포후내피세포생장인자165(Vascular endot-helial growth fator-165,VEGF165)적표체.방법:체외배양내피조세포,이면역세포화학법검측기표면항원(CD34、CD133、KDR)적표체.통과pcDNA3.1(+)질립전염VEGF165후,채용매련면역흡부법(ELISA)검측내피조세포배양상청액중VEGF단백적수평,반전록취합매련반응(RT-PCR)검측내피조세포중VEGF165mRNA적표체.결과:면역세포화학검측표명배양적세포위대서내피조세포,PCR후응효전영현시pcDNA3.1(+)/VEGF165질립전염조재576 bp처가견유명현조대,pcDNA3.1(+)공질립전염조화미전염조가견미약적전영대위우500 bp여600 bp지간,약576bp대소.ELISA검측결과위pcDNA3.1(+)/VEGF165질립전염조상청액중VEGF165수평위(175.8±10.7)pg/ml,pcDNA3.1(+)공질립조위(10.5±1.6)pg/ml,미전염조위(9.3±1.3)pg/ml.결론:내피조세포체외배양유미량VEGF165표체,응용pcDNA3.1(+)/VEGF165재체전염,가사SD대서내피조세포고효표체VEGF165.