生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
6期
1004-1009
,共6页
于慧敏%马现锋%罗晖%文程%沈忠耀
于慧敏%馬現鋒%囉暉%文程%瀋忠耀
우혜민%마현봉%라휘%문정%침충요
D-氨基酸氧化酶%大肠杆菌麦芽糖结合蛋白%透明颤菌血红蛋白%融合表达
D-氨基痠氧化酶%大腸桿菌麥芽糖結閤蛋白%透明顫菌血紅蛋白%融閤錶達
D-안기산양화매%대장간균맥아당결합단백%투명전균혈홍단백%융합표체
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶.为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达.分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N.端融合蛋白.其中.MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pMKC-DAAO)和诱导型菌株(JM105/pMKL-DAAO)中表达时.目标蛋白的可溶,陛表达量分别达到全细胞蛋白表达量的28%以上和17%左右,比无MBP融合的对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO分别提高3.7和1.8倍;但其酶活水平显著下降.VHb融合蛋白vHb-TvDAAO在重组菌BL21(DE3)/pET-VDAAO中摇瓶诱导表述时.DAAO酶活达到了3.24 u/mL,比对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO提高了约90%.
D-氨基痠氧化酶(DAAO)是一種重要的工業酶.為瞭進一步提高DAAO在大腸桿菌中的可溶性和活性錶達.分彆構建瞭麥芽糖結閤蛋白(MBP)和透明顫菌血紅蛋白與三角酵母DAAO(TvDAAO)的N.耑融閤蛋白.其中.MBP融閤蛋白MBP-TvDAAO在組成型(JM105/pMKC-DAAO)和誘導型菌株(JM105/pMKL-DAAO)中錶達時.目標蛋白的可溶,陛錶達量分彆達到全細胞蛋白錶達量的28%以上和17%左右,比無MBP融閤的對照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO分彆提高3.7和1.8倍;但其酶活水平顯著下降.VHb融閤蛋白vHb-TvDAAO在重組菌BL21(DE3)/pET-VDAAO中搖瓶誘導錶述時.DAAO酶活達到瞭3.24 u/mL,比對照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO提高瞭約90%.
D-안기산양화매(DAAO)시일충중요적공업매.위료진일보제고DAAO재대장간균중적가용성화활성표체.분별구건료맥아당결합단백(MBP)화투명전균혈홍단백여삼각효모DAAO(TvDAAO)적N.단융합단백.기중.MBP융합단백MBP-TvDAAO재조성형(JM105/pMKC-DAAO)화유도형균주(JM105/pMKL-DAAO)중표체시.목표단백적가용,폐표체량분별체도전세포단백표체량적28%이상화17%좌우,비무MBP융합적대조균주BL21(DE3)/pET-DAAO분별제고3.7화1.8배;단기매활수평현저하강.VHb융합단백vHb-TvDAAO재중조균BL21(DE3)/pET-VDAAO중요병유도표술시.DAAO매활체도료3.24 u/mL,비대조균주BL21(DE3)/pET-DAAO제고료약90%.
