CAJ | 학술논문

背景:膜联蛋白A1 参与细胞凋亡的调控.目的:针对兔膜联蛋白A1 基因构建短发夹RNA 慢病毒载体,并检测其对成骨细胞的沉默效率.方法:针对兔膜联蛋白A1 基因设计RNA 干扰靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与BamHI 和EcoRI 双酶切后的pGLV/H1/GFP 载体连接成pGLV-shANXA1,PCR 筛选阳性克隆,测序鉴定.pGLV-shANXA1 和pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3 共转染293FT 细胞包装产生慢病毒颗粒LV-shANXA1,并测定其滴度,随后将LV-shANXA1感染兔成骨细胞.结果与结论:经PCR 和测序证实构建片段大小及DNA 序列与目标序列一致,shANXA1 片段完全正确插入慢病毒载体pGLV/H1/GFP 中.包装浓缩慢病毒颗粒LV-shANXA1 的滴度为3.8×108 TU/L.经嘌呤霉素筛选后,感染复数为50 时,LV-shANXA1 对成骨细胞感染效率为80%;感染复数为100 时,感染效率为95%.Real-time PCR 和Western blot 检测显示,LV-shANXA1-901 对膜联蛋白A1 基因的沉默效率最高,在感染复数为50 时,沉默效率可达71.2%.表明实验成功构建的兔膜联蛋白A1 基因短发夹RNA 慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.
배경:막련단백A1 삼여세포조망적조공.목적:침대토막련단백A1 기인구건단발협RNA 만병독재체,병검측기대성골세포적침묵효솔.방법:침대토막련단백A1 기인설계RNA 간우파서렬,합성Oligo DNA,퇴화형성쌍련DNA,여BamHI 화EcoRI 쌍매절후적pGLV/H1/GFP 재체련접성pGLV-shANXA1,PCR 사선양성극륭,측서감정.pGLV-shANXA1 화pGLV/helper-1、pGLV/helper-2、pGLV/helper-3 공전염293FT 세포포장산생만병독과립LV-shANXA1,병측정기적도,수후장LV-shANXA1감염토성골세포.결과여결론:경PCR 화측서증실구건편단대소급DNA 서렬여목표서렬일치,shANXA1 편단완전정학삽입만병독재체pGLV/H1/GFP 중.포장농축만병독과립LV-shANXA1 적적도위3.8×108 TU/L.경표령매소사선후,감염복수위50 시,LV-shANXA1 대성골세포감염효솔위80%;감염복수위100 시,감염효솔위95%.Real-time PCR 화Western blot 검측현시,LV-shANXA1-901 대막련단백A1 기인적침묵효솔최고,재감염복수위50 시,침묵효솔가체71.2%.표명실험성공구건적토막련단백A1 기인단발협RNA 만병독재체능구재세포수평유효침묵파기인.