口腔生物医学
口腔生物醫學
구강생물의학
ORAL BIOMEDICINE
2012年
3期
113-116
,共4页
克隆构建%FBXL11%逆转录病毒%间充质干细胞
剋隆構建%FBXL11%逆轉錄病毒%間充質榦細胞
극륭구건%FBXL11%역전록병독%간충질간세포
目的:构建pQCXIH-HA-FBXL11逆转录病毒表达质粒,鉴定表达,在牙髓间充质干细胞建立过表达FBXL11的稳定转染细胞.方法:以牙髓干细胞的cDNA为模板,利用PCR方法扩增目的基因FBXL11,PCR产物纯化回收、连接、酶切、测序鉴定,构建pQCXIH-HA-FBXL11质粒.利用FuGENE6转染293T细胞,蛋白质免疫印迹法和实时荧光定量PCR法在蛋白及mRNA水平检测HA-FBXL11的表达.利用逆转录病毒感染牙髓间充质干细胞.结果:成功构建了逆转录病毒表达质粒pQCXIH-HA-FBXL11,蛋白及mRNA水平检测证实其在293T细胞可以有效的表达.成功建立了过表达HA-FBXL11的牙髓间充质干细胞稳定转染细胞.结论:通过构建pQCXIH-HA-FBXL11表达质粒及在牙髓间充质干细胞建立过表达FBXL11稳定转染细胞,为进一步研究FBXL11对间充质干细胞的功能调控奠定了基础.
目的:構建pQCXIH-HA-FBXL11逆轉錄病毒錶達質粒,鑒定錶達,在牙髓間充質榦細胞建立過錶達FBXL11的穩定轉染細胞.方法:以牙髓榦細胞的cDNA為模闆,利用PCR方法擴增目的基因FBXL11,PCR產物純化迴收、連接、酶切、測序鑒定,構建pQCXIH-HA-FBXL11質粒.利用FuGENE6轉染293T細胞,蛋白質免疫印跡法和實時熒光定量PCR法在蛋白及mRNA水平檢測HA-FBXL11的錶達.利用逆轉錄病毒感染牙髓間充質榦細胞.結果:成功構建瞭逆轉錄病毒錶達質粒pQCXIH-HA-FBXL11,蛋白及mRNA水平檢測證實其在293T細胞可以有效的錶達.成功建立瞭過錶達HA-FBXL11的牙髓間充質榦細胞穩定轉染細胞.結論:通過構建pQCXIH-HA-FBXL11錶達質粒及在牙髓間充質榦細胞建立過錶達FBXL11穩定轉染細胞,為進一步研究FBXL11對間充質榦細胞的功能調控奠定瞭基礎.
목적:구건pQCXIH-HA-FBXL11역전록병독표체질립,감정표체,재아수간충질간세포건립과표체FBXL11적은정전염세포.방법:이아수간세포적cDNA위모판,이용PCR방법확증목적기인FBXL11,PCR산물순화회수、련접、매절、측서감정,구건pQCXIH-HA-FBXL11질립.이용FuGENE6전염293T세포,단백질면역인적법화실시형광정량PCR법재단백급mRNA수평검측HA-FBXL11적표체.이용역전록병독감염아수간충질간세포.결과:성공구건료역전록병독표체질립pQCXIH-HA-FBXL11,단백급mRNA수평검측증실기재293T세포가이유효적표체.성공건립료과표체HA-FBXL11적아수간충질간세포은정전염세포.결론:통과구건pQCXIH-HA-FBXL11표체질립급재아수간충질간세포건립과표체FBXL11은정전염세포,위진일보연구FBXL11대간충질간세포적공능조공전정료기출.
