SARS冠状病毒M蛋白全长基因的克隆、表达与纯化
SARS관상병독M단백전장기인적극륭、표체여순화
Cloning,expression and purification of the M gene from SARS Coronavirus
  • 万方数据
    中国人兽共患病杂志 중국인수공환병잡지
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2005年 12期 1100-1102,1067 ,共4页

    雷明军%吴少庭%戴五星%秦莉%潘晖榕%袁仕善%黄达娜%高世同%张仁利%林绮萍

    뢰명군%오소정%대오성%진리%반휘용%원사선%황체나%고세동%장인리%림기평

    SARS%M 蛋白%基因表达%蛋白纯化%免疫印迹 SARS%M 蛋白%基因錶達%蛋白純化%免疫印跡
    SARS%M 단백%기인표체%단백순화%면역인적
    目的克隆SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列, 构建原核重组表达质粒pET23a-M, 并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达、纯化.表达产物用Western Blot检测其抗原性.方法 RT-PCR 扩增M编码基因目的片段, 胶回收纯化, 插入克隆载体pMD-18T载体并转化大肠杆菌DH5α.序列测定后亚克隆至表达质粒载体pET23a, 构建重组体pET23a-M,转化大肠杆菌DH5α.筛选阳性克隆,以限制性酶切分析鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG) 进行诱导表达.用SDS-PAGE与免疫印迹分析表达产物.结果 PCR扩增出约675bp的特异性片段,与预期片段大小相符,测序鉴定无有义突变;所构建的pET23a-M 重组体阳性克隆经PCR与双酶切鉴定,与预期结果一致;SDS-PAGE显示表达产物约27kD;表达产物经金属螯和层析纯化;免疫印迹表明表达产物能被混合的SARS病人恢复期血清识别.结论成功克隆了SARS冠状病毒M蛋白基因编码序列,构建了pET23a-M 表达质粒,诱导表达并纯化出了SARS冠状病毒M蛋白,并以免疫印迹鉴定.本研究的成功为进一步进行SARS病毒诊断试剂与疫苗的开发奠定了基础.
    목적극륭SARS관상병독M단백기인편마서렬, 구건원핵중조표체질립pET23a-M, 병재대장간균BL21(DE3)중진행표체、순화.표체산물용Western Blot검측기항원성.방법 RT-PCR 확증M편마기인목적편단, 효회수순화, 삽입극륭재체pMD-18T재체병전화대장간균DH5α.서렬측정후아극륭지표체질립재체pET23a, 구건중조체pET23a-M,전화대장간균DH5α.사선양성극륭,이한제성매절분석감정후,전화대장간균BL21(DE3)이이병기류대반유당감(IPTG) 진행유도표체.용SDS-PAGE여면역인적분석표체산물.결과 PCR확증출약675bp적특이성편단,여예기편단대소상부,측서감정무유의돌변;소구건적pET23a-M 중조체양성극륭경PCR여쌍매절감정,여예기결과일치;SDS-PAGE현시표체산물약27kD;표체산물경금속오화층석순화;면역인적표명표체산물능피혼합적SARS병인회복기혈청식별.결론성공극륭료SARS관상병독M단백기인편마서렬,구건료pET23a-M 표체질립,유도표체병순화출료SARS관상병독M단백,병이면역인적감정.본연구적성공위진일보진행SARS병독진단시제여역묘적개발전정료기출.
    원문보기 원문다운로드 사이트로이동
저자의 최근 논문