北京大学学报（医学版）
北京大學學報（醫學版）
북경대학학보（의학판）
JOURNAL OF BEIJING MEDICAL UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES)
2006年
5期
529-532
,共4页
张玉稚%王汉森%潘虹%李美蓉%包新华%金靖%吴希如
張玉稚%王漢森%潘虹%李美蓉%包新華%金靖%吳希如
장옥치%왕한삼%반홍%리미용%포신화%금정%오희여
DNA结合蛋白质类%DNA甲基化%RNA,小分子干扰
DNA結閤蛋白質類%DNA甲基化%RNA,小分子榦擾
DNA결합단백질류%DNA갑기화%RNA,소분자간우
目的:以RNAi技术寻找抑制大鼠Mecp2基因表达的有效序列.方法:首先构建大鼠Mecp2基因与红色荧光蛋白(RFP)的融合基因表达质粒,然后分别与针对大鼠Mecp2基因的4个备选小干扰RNA(siRNA, small interference RNA)共转染HEK293T细胞,构成外源基因系统,以此对于4个备选的siRNA对大鼠Mecp2基因的抑制有效性进行筛选.然后将筛选到的有效序列siRNA转染自身表达大鼠Mecp2基因的PC12细胞,以免疫荧光染色显示大鼠Mecp2蛋白的表达情况,通过内源大鼠Mecp2基因表达被抑制的情况验证所筛选序列的RNA干扰有效性.结果:针对大鼠Mecp2基因mRNA 918～936位核苷酸的siRNA(序列:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)是对大鼠Mecp2基因进行RNA干扰的有效序列.此有效siRNA序列所在的位置相当于大鼠Mecp2基因第4外显子,推测可同时抑制大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的表达.且此靶序列位于大鼠Mecp2基因编码区,推测可同时抑制1.9 kb和10 kb的大鼠Mecp2基因mRNA的表达.结论:本研究为建立稳定的大鼠神经元Mecp2基因表达敲低的神经细胞模型和研究脑发育过程中Mecp2基因的功能打下了基础.
目的:以RNAi技術尋找抑製大鼠Mecp2基因錶達的有效序列.方法:首先構建大鼠Mecp2基因與紅色熒光蛋白(RFP)的融閤基因錶達質粒,然後分彆與針對大鼠Mecp2基因的4箇備選小榦擾RNA(siRNA, small interference RNA)共轉染HEK293T細胞,構成外源基因繫統,以此對于4箇備選的siRNA對大鼠Mecp2基因的抑製有效性進行篩選.然後將篩選到的有效序列siRNA轉染自身錶達大鼠Mecp2基因的PC12細胞,以免疫熒光染色顯示大鼠Mecp2蛋白的錶達情況,通過內源大鼠Mecp2基因錶達被抑製的情況驗證所篩選序列的RNA榦擾有效性.結果:針對大鼠Mecp2基因mRNA 918～936位覈苷痠的siRNA(序列:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)是對大鼠Mecp2基因進行RNA榦擾的有效序列.此有效siRNA序列所在的位置相噹于大鼠Mecp2基因第4外顯子,推測可同時抑製大鼠Mecp2α和大鼠Mecp2β的錶達.且此靶序列位于大鼠Mecp2基因編碼區,推測可同時抑製1.9 kb和10 kb的大鼠Mecp2基因mRNA的錶達.結論:本研究為建立穩定的大鼠神經元Mecp2基因錶達敲低的神經細胞模型和研究腦髮育過程中Mecp2基因的功能打下瞭基礎.
목적:이RNAi기술심조억제대서Mecp2기인표체적유효서렬.방법:수선구건대서Mecp2기인여홍색형광단백(RFP)적융합기인표체질립,연후분별여침대대서Mecp2기인적4개비선소간우RNA(siRNA, small interference RNA)공전염HEK293T세포,구성외원기인계통,이차대우4개비선적siRNA대대서Mecp2기인적억제유효성진행사선.연후장사선도적유효서렬siRNA전염자신표체대서Mecp2기인적PC12세포,이면역형광염색현시대서Mecp2단백적표체정황,통과내원대서Mecp2기인표체피억제적정황험증소사선서렬적RNA간우유효성.결과:침대대서Mecp2기인mRNA 918～936위핵감산적siRNA(서렬:5′-GCUGUGAAGGAAUCUUCUA-3′)시대대서Mecp2기인진행RNA간우적유효서렬.차유효siRNA서렬소재적위치상당우대서Mecp2기인제4외현자,추측가동시억제대서Mecp2α화대서Mecp2β적표체.차차파서렬위우대서Mecp2기인편마구,추측가동시억제1.9 kb화10 kb적대서Mecp2기인mRNA적표체.결론:본연구위건립은정적대서신경원Mecp2기인표체고저적신경세포모형화연구뇌발육과정중Mecp2기인적공능타하료기출.
