CAJ | 학술논문

目的:探讨逆转录病毒介导的乙型肝炎病毒(HBV)X,P单、双靶区的反义RNA在乙型肝炎转基因小鼠肝细胞中HBV复制的影响.方法:构建表达HBV X,P双靶区正、反义RNA的重组载体质粒,与脂质体混合,注入小鼠体内,第8周时取小鼠肝脏,提取肝组织总RNA,进行逆转录,将逆转录后的cDNA用PCR扩增,琼脂凝胶电泳和DNA测序定性,荧光聚合酶链反应定量;提取肝组织基因组DNA,利用荧光聚合酶链反应定量测定HBVDNA含量.结果:经过PCR扩增,琼脂凝胶电泳和DNA测序定性,荧光聚合酶链反应定量等方法检测到小鼠肝脏内反义RNA得到高效表达;8 wk后,对HBV DNA(×105 copies/g)的作用:与对照组相比(7.24±1.62),空质粒组(9.49±3.34)及正义RNA组(6.52±1.53)之间无明显差异,单(2.60±1.13,2.83±1.67)、双靶区反义RNA组(3.24±0.45)与对照组之间有明显差异(P＜0.05),但单、双靶区反义RNA组间无明显差异(P＞0.05).结论:将脂质体包裹逆转录病毒载体(质粒)介导的单、双靶区乙肝病毒反义RNA经iv导入转基因小鼠细胞的方法可行;反义RNA对乙型肝炎病毒转基因小鼠有显著抗HBV复制作用;对转基因小鼠肝脏中HBV DNA的复制有明显的抑制作用,但单、双靶区反义RNA组间无明显差异.
목적:탐토역전록병독개도적을형간염병독(HBV)X,P단、쌍파구적반의RNA재을형간염전기인소서간세포중HBV복제적영향.방법:구건표체HBV X,P쌍파구정、반의RNA적중조재체질립,여지질체혼합,주입소서체내,제8주시취소서간장,제취간조직총RNA,진행역전록,장역전록후적cDNA용PCR확증,경지응효전영화DNA측서정성,형광취합매련반응정량;제취간조직기인조DNA,이용형광취합매련반응정량측정HBVDNA함량.결과:경과PCR확증,경지응효전영화DNA측서정성,형광취합매련반응정량등방법검측도소서간장내반의RNA득도고효표체;8 wk후,대HBV DNA(×105 copies/g)적작용:여대조조상비(7.24±1.62),공질립조(9.49±3.34)급정의RNA조(6.52±1.53)지간무명현차이,단(2.60±1.13,2.83±1.67)、쌍파구반의RNA조(3.24±0.45)여대조조지간유명현차이(P＜0.05),단단、쌍파구반의RNA조간무명현차이(P＞0.05).결론:장지질체포과역전록병독재체(질립)개도적단、쌍파구을간병독반의RNA경iv도입전기인소서세포적방법가행;반의RNA대을형간염병독전기인소서유현저항HBV복제작용;대전기인소서간장중HBV DNA적복제유명현적억제작용,단단、쌍파구반의RNA조간무명현차이.