中国科学C辑
中國科學C輯
중국과학C집
SCIENCE IN CHINA (SERIES C)
2007年
1期
20-27
,共8页
樊廷俊%赵君%付永锋%丛日山%郭瑞超%刘万顺%韩宝琴%于秋涛%王晶
樊廷俊%趙君%付永鋒%叢日山%郭瑞超%劉萬順%韓寶琴%于鞦濤%王晶
번정준%조군%부영봉%총일산%곽서초%류만순%한보금%우추도%왕정
角膜内皮细胞%细胞系%染色体数目%神经元特异性烯醇化酶%血管内皮生长因子%家兔
角膜內皮細胞%細胞繫%染色體數目%神經元特異性烯醇化酶%血管內皮生長因子%傢兔
각막내피세포%세포계%염색체수목%신경원특이성희순화매%혈관내피생장인자%가토
为了建立兔角膜内皮(RCE)细胞系, 以家兔角膜为实验材料对RCE细胞的体外培养及其细胞系的建立进行了研究. 取活家兔角膜, 采用内皮面朝下进行贴板培养, 并利用时间梯度连续揭膜法筛选出仅含有纯净RCE细胞的培养孔, 收集纯一的RCE细胞悬浮于含有硫酸软骨素氧化降解物、牛眼生素、表皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、家兔角膜基质细胞培养液、羧甲基壳多糖、N-乙酰葡萄糖盐酸盐和氨基葡萄糖盐酸盐的DMEM/F12培养液(20%胎牛血清)中, 置CO2培养箱中启动原代培养. 启动培养的RCE细胞呈四角形或多角形, 3周后即可长成单层. 在随后的继代培养中, RCE细胞的形状逐渐由多角形变为成纤维样. RCE细胞生长状态稳定, 现已被传至67代, 已经建成了一个新的连续性RCE细胞系. 经鉴定, 该细胞系细胞的群体倍增时间约为53.8 h; 第67代培养细胞的特征性染色体数目为44条, 但出现了染色体的非整倍性. 综合特征性染色体数目、抗神经元特异性烯醇化酶(NSE)抗体的免疫细胞化学染色、血管内皮生长因子(VEGF165)实验和形态回复实验的研究结果, 证明该细胞系确为家兔角膜内皮细胞系, 为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究及人造角膜内皮的研制奠定了基础.
為瞭建立兔角膜內皮(RCE)細胞繫, 以傢兔角膜為實驗材料對RCE細胞的體外培養及其細胞繫的建立進行瞭研究. 取活傢兔角膜, 採用內皮麵朝下進行貼闆培養, 併利用時間梯度連續揭膜法篩選齣僅含有純淨RCE細胞的培養孔, 收集純一的RCE細胞懸浮于含有硫痠軟骨素氧化降解物、牛眼生素、錶皮細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、傢兔角膜基質細胞培養液、羧甲基殼多糖、N-乙酰葡萄糖鹽痠鹽和氨基葡萄糖鹽痠鹽的DMEM/F12培養液(20%胎牛血清)中, 置CO2培養箱中啟動原代培養. 啟動培養的RCE細胞呈四角形或多角形, 3週後即可長成單層. 在隨後的繼代培養中, RCE細胞的形狀逐漸由多角形變為成纖維樣. RCE細胞生長狀態穩定, 現已被傳至67代, 已經建成瞭一箇新的連續性RCE細胞繫. 經鑒定, 該細胞繫細胞的群體倍增時間約為53.8 h; 第67代培養細胞的特徵性染色體數目為44條, 但齣現瞭染色體的非整倍性. 綜閤特徵性染色體數目、抗神經元特異性烯醇化酶(NSE)抗體的免疫細胞化學染色、血管內皮生長因子(VEGF165)實驗和形態迴複實驗的研究結果, 證明該細胞繫確為傢兔角膜內皮細胞繫, 為哺乳動物角膜內皮細胞的理論研究及人造角膜內皮的研製奠定瞭基礎.
위료건립토각막내피(RCE)세포계, 이가토각막위실험재료대RCE세포적체외배양급기세포계적건립진행료연구. 취활가토각막, 채용내피면조하진행첩판배양, 병이용시간제도련속게막법사선출부함유순정RCE세포적배양공, 수집순일적RCE세포현부우함유류산연골소양화강해물、우안생소、표피세포생장인자、감성성섬유세포생장인자、가토각막기질세포배양액、최갑기각다당、N-을선포도당염산염화안기포도당염산염적DMEM/F12배양액(20%태우혈청)중, 치CO2배양상중계동원대배양. 계동배양적RCE세포정사각형혹다각형, 3주후즉가장성단층. 재수후적계대배양중, RCE세포적형상축점유다각형변위성섬유양. RCE세포생장상태은정, 현이피전지67대, 이경건성료일개신적련속성RCE세포계. 경감정, 해세포계세포적군체배증시간약위53.8 h; 제67대배양세포적특정성염색체수목위44조, 단출현료염색체적비정배성. 종합특정성염색체수목、항신경원특이성희순화매(NSE)항체적면역세포화학염색、혈관내피생장인자(VEGF165)실험화형태회복실험적연구결과, 증명해세포계학위가토각막내피세포계, 위포유동물각막내피세포적이론연구급인조각막내피적연제전정료기출.
