CAJ | 학술논문

探讨胰腺干细胞的分离、培养及其特异性标志物巢蛋白鉴定的基本技术方法.选取新生昆明种小鼠25只,分离胰腺组织,Ⅴ型胶原酶消化,结合自然沉降技术形成不连续密度梯度离心.分别从磷酸盐缓冲液/1.068 g/L Percoll液(第一界面)、1.068 g/L Percoll液/1.096 g/LPercoll液(第二界面)、1.096 g/L Percoll液/1.188 g/L Percoll液(第三界面)收集细胞.各界面细胞均加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM低糖培养基,置于经多聚赖氨酸处理的培养瓶中常规培养.24 h后将培养基更换为不含胎牛血清的DMEM低糖培养基,并加入10 mg/L的角质细胞生长因子和20 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子,观察体外培养的各界面细胞的形态学特征.胰腺的内分泌部存在β细胞,双硫腙能与β细胞分泌颗粒中的锌螯合而呈现铁红色.将收集的各界面细胞进行双硫腙染色,检测细胞来源.免疫组织化学法检测各界面巢蛋白的表达.结果第一、二界面细胞65%～90%双硫腙染色呈阳性,来源于胰腺的内分泌部;第三界面细胞双硫腙染色呈阴性,来源于胰腺的外分泌部.从胰腺的内分泌部获得的细胞聚集呈胰岛样细胞团贴壁生长,48～72 h后可见许多大、圆、单个核的细胞从胰岛样细胞团中向周围长出,以附壁生长的方式在局部形成细胞集落.从胰腺的外分泌部获得的细胞主要呈上皮样生长,并逐渐汇合成片,在上皮样细胞集落的周围可见大、圆、单个核的细胞生长并形成集落.各界面大、圆、单个核的细胞,巢蛋白均呈阳性表达.提示从胰腺内、外分泌部的组织中能成功获取胰腺干细胞特异性标志Nestin表达阳性的干样细胞.
탐토이선간세포적분리、배양급기특이성표지물소단백감정적기본기술방법.선취신생곤명충소서25지,분리이선조직,Ⅴ형효원매소화,결합자연침강기술형성불련속밀도제도리심.분별종린산염완충액/1.068 g/L Percoll액(제일계면)、1.068 g/L Percoll액/1.096 g/LPercoll액(제이계면)、1.096 g/L Percoll액/1.188 g/L Percoll액(제삼계면)수집세포.각계면세포균가입함체적분수위0.1태우혈청적DMEM저당배양기,치우경다취뢰안산처리적배양병중상규배양.24 h후장배양기경환위불함태우혈청적DMEM저당배양기,병가입10 mg/L적각질세포생장인자화20 μg/L적감성성섬유세포생장인자,관찰체외배양적각계면세포적형태학특정.이선적내분비부존재β세포,쌍류종능여β세포분비과립중적자오합이정현철홍색.장수집적각계면세포진행쌍류종염색,검측세포래원.면역조직화학법검측각계면소단백적표체.결과제일、이계면세포65%～90%쌍류종염색정양성,래원우이선적내분비부;제삼계면세포쌍류종염색정음성,래원우이선적외분비부.종이선적내분비부획득적세포취집정이도양세포단첩벽생장,48～72 h후가견허다대、원、단개핵적세포종이도양세포단중향주위장출,이부벽생장적방식재국부형성세포집락.종이선적외분비부획득적세포주요정상피양생장,병축점회합성편,재상피양세포집락적주위가견대、원、단개핵적세포생장병형성집락.각계면대、원、단개핵적세포,소단백균정양성표체.제시종이선내、외분비부적조직중능성공획취이선간세포특이성표지Nestin표체양성적간양세포.