CAJ | 학술논문

目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移过程中起关键作用,其信号肽在该酶翻译后处理过程中起重要作用.本研究旨在探索乙酰肝素酶在哺乳动物细胞中的表达特性及其信号肽对此酶功能活性的影响.方法:从人胎盘cDNA文库中扩增乙酰肝素酶全长编码基因,克隆入pGEM-T载体中,测序鉴定序列完全正确后,将此基因的全长和不含信号肽基因序列分别克隆入真核表达载体pcDNA4.1/Myc-His中构建pcDNA4.1/Myc-His full HPA和pcDNA4.1/Myc-His part HPA,转化COS-7细胞进行瞬时表达,分析这两种乙酰肝素酶蛋白的表达特性及功能活性.结果:在转染了乙酰肝素酶全基因的COS-7细胞裂解液中检测到该酶的功能活性及大小约53×103(Mr)的目的蛋白免疫印迹表达带,为切割激活后乙酰肝素酶羧基端大亚基与标签蛋白的融合体.在转染了敲除信号肽的乙酰肝素酶基因的COS-7细胞裂解液中测到未被切割激活的大小约65×103(Mr)的目的蛋白免疫印迹表达带,未能检测到该酶的功能活性.结论:在COS-7细胞中表达的完整的乙酰肝素酶蛋白和不含信号肽的乙酰肝素酶蛋白均位于细胞内,没有或很少被分泌到细胞外,提示该酶在正常状态下主要分布在细胞内.含信号肽的酶蛋白在翻译后处理过程中被细胞内的蛋白酶切割成2个亚基而被激活,具有功能活性.而不含信号肽的酶蛋白没有被切割而成为有活性的酶,提示乙酰肝素酶的信号肽对其翻译后加工、激活过程有重要的影响.
목적:을선간소매재종류전이과정중기관건작용,기신호태재해매번역후처리과정중기중요작용.본연구지재탐색을선간소매재포유동물세포중적표체특성급기신호태대차매공능활성적영향.방법:종인태반cDNA문고중확증을선간소매전장편마기인,극륭입pGEM-T재체중,측서감정서렬완전정학후,장차기인적전장화불함신호태기인서렬분별극륭입진핵표체재체pcDNA4.1/Myc-His중구건pcDNA4.1/Myc-His full HPA화pcDNA4.1/Myc-His part HPA,전화COS-7세포진행순시표체,분석저량충을선간소매단백적표체특성급공능활성.결과:재전염료을선간소매전기인적COS-7세포렬해액중검측도해매적공능활성급대소약53×103(Mr)적목적단백면역인적표체대,위절할격활후을선간소매최기단대아기여표첨단백적융합체.재전염료고제신호태적을선간소매기인적COS-7세포렬해액중측도미피절할격활적대소약65×103(Mr)적목적단백면역인적표체대,미능검측도해매적공능활성.결론:재COS-7세포중표체적완정적을선간소매단백화불함신호태적을선간소매단백균위우세포내,몰유혹흔소피분비도세포외,제시해매재정상상태하주요분포재세포내.함신호태적매단백재번역후처리과정중피세포내적단백매절할성2개아기이피격활,구유공능활성.이불함신호태적매단백몰유피절할이성위유활성적매,제시을선간소매적신호태대기번역후가공、격활과정유중요적영향.