细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
9期
887-889
,共3页
孙守勋%李强%刘静%李玲%蒲晓允
孫守勛%李彊%劉靜%李玲%蒲曉允
손수훈%리강%류정%리령%포효윤
TLR2%原核表达%多克隆抗体%单个核细胞
TLR2%原覈錶達%多剋隆抗體%單箇覈細胞
TLR2%원핵표체%다극륭항체%단개핵세포
目的: 在原核系统中表达人Toll样受体2(TLR2)胞外区基因的融合蛋白并制备多克隆抗体.方法: 应用RT-PCR方法从人外周血单个核细胞中扩增TLR2胞外区基因, 将其克隆到表达载体pET-32a(+)上构建重组原核表达质粒, 并在大肠杆菌中诱导表达, 目的融合蛋白经Ni-NTA亲和层析纯化, 用SDS-PAGE和 Western blot进行鉴定.用纯化的蛋白免疫新西兰白兔, 制备多克隆抗体, 采用Western blot对抗体进行鉴定, 并用ELISA分析抗体活性.结果: 成功构建了pET-32a(+)-TLR2重组表达质粒并在大肠杆菌中进行表达, 获得了纯化重组蛋白, 重组蛋白免疫白兔后能够有效地刺激抗体产生, 并具有良好的免疫活性.结论: 成功地获得人TLR2胞外区基因的融合蛋白, 制备的多克隆抗体为进一步研究TLR2胞外区的功能和生物活性奠定基础.
目的: 在原覈繫統中錶達人Toll樣受體2(TLR2)胞外區基因的融閤蛋白併製備多剋隆抗體.方法: 應用RT-PCR方法從人外週血單箇覈細胞中擴增TLR2胞外區基因, 將其剋隆到錶達載體pET-32a(+)上構建重組原覈錶達質粒, 併在大腸桿菌中誘導錶達, 目的融閤蛋白經Ni-NTA親和層析純化, 用SDS-PAGE和 Western blot進行鑒定.用純化的蛋白免疫新西蘭白兔, 製備多剋隆抗體, 採用Western blot對抗體進行鑒定, 併用ELISA分析抗體活性.結果: 成功構建瞭pET-32a(+)-TLR2重組錶達質粒併在大腸桿菌中進行錶達, 穫得瞭純化重組蛋白, 重組蛋白免疫白兔後能夠有效地刺激抗體產生, 併具有良好的免疫活性.結論: 成功地穫得人TLR2胞外區基因的融閤蛋白, 製備的多剋隆抗體為進一步研究TLR2胞外區的功能和生物活性奠定基礎.
목적: 재원핵계통중표체인Toll양수체2(TLR2)포외구기인적융합단백병제비다극륭항체.방법: 응용RT-PCR방법종인외주혈단개핵세포중확증TLR2포외구기인, 장기극륭도표체재체pET-32a(+)상구건중조원핵표체질립, 병재대장간균중유도표체, 목적융합단백경Ni-NTA친화층석순화, 용SDS-PAGE화 Western blot진행감정.용순화적단백면역신서란백토, 제비다극륭항체, 채용Western blot대항체진행감정, 병용ELISA분석항체활성.결과: 성공구건료pET-32a(+)-TLR2중조표체질립병재대장간균중진행표체, 획득료순화중조단백, 중조단백면역백토후능구유효지자격항체산생, 병구유량호적면역활성.결론: 성공지획득인TLR2포외구기인적융합단백, 제비적다극륭항체위진일보연구TLR2포외구적공능화생물활성전정기출.
