江苏农业科学
江囌農業科學
강소농업과학
JIANGSU AGRICULTURAL SCIENCES
2011年
2期
45-47
,共3页
李文秀%周凤云%毛伟平%潘杨滨%何志娟%徐翀%刘宣宣
李文秀%週鳳雲%毛偉平%潘楊濱%何誌娟%徐翀%劉宣宣
리문수%주봉운%모위평%반양빈%하지연%서충%류선선
ICOS%Jurkat细胞%pET-28a质粒%重叠延伸PCR%原核表达
ICOS%Jurkat細胞%pET-28a質粒%重疊延伸PCR%原覈錶達
ICOS%Jurkat세포%pET-28a질립%중첩연신PCR%원핵표체
构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达.根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定.转化E.coli BL21,IPTG诱导表达目的蛋白.结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确.IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31ku.这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达.为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础.
構建重組人ICOS胞外區原覈錶達載體,併進行初步錶達.根據GenBank基因庫中ICOS胞外區基因序列設計引物,用RT-PCR法從人T淋巴瘤細胞Jurkat的總mRNA中擴增齣ICOS胞外區基因併運用重疊延伸PCR技術擴增齣ICOS胞外區同源二聚體,併將ICOS胞外區同源二聚體插入到原覈錶達載體PET-28a中,併對重組質粒進行鑒定.轉化E.coli BL21,IPTG誘導錶達目的蛋白.結果穫得ICOS胞外區同源二聚體基因大小為757bp,構建的重組錶達載體中目的基因序列完全正確.IPTG誘導錶達後,SDS-PAGE分析錶明目的蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效錶達,相對分子質量約為31ku.這說明成功地構建人重組ICOS胞外區同源二聚體的原覈錶達載體,併實現在大腸桿菌中大量錶達.為下一步蛋白純化及製備抗ICOS單剋隆抗體奠定瞭基礎.
구건중조인ICOS포외구원핵표체재체,병진행초보표체.근거GenBank기인고중ICOS포외구기인서렬설계인물,용RT-PCR법종인T림파류세포Jurkat적총mRNA중확증출ICOS포외구기인병운용중첩연신PCR기술확증출ICOS포외구동원이취체,병장ICOS포외구동원이취체삽입도원핵표체재체PET-28a중,병대중조질립진행감정.전화E.coli BL21,IPTG유도표체목적단백.결과획득ICOS포외구동원이취체기인대소위757bp,구건적중조표체재체중목적기인서렬완전정학.IPTG유도표체후,SDS-PAGE분석표명목적단백재E.coli BL21(DE3)중고효표체,상대분자질량약위31ku.저설명성공지구건인중조ICOS포외구동원이취체적원핵표체재체,병실현재대장간균중대량표체.위하일보단백순화급제비항ICOS단극륭항체전정료기출.
