应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2007年
2期
152-155
,共4页
郭经宇%王茂华%刘绵学%王慧%徐柯%杨毅%李旭锋
郭經宇%王茂華%劉綿學%王慧%徐柯%楊毅%李旭鋒
곽경우%왕무화%류면학%왕혜%서가%양의%리욱봉
甘蓝型油菜%脂肪酸链延长酶1%融合蛋白%原核表达
甘藍型油菜%脂肪痠鏈延長酶1%融閤蛋白%原覈錶達
감람형유채%지방산련연장매1%융합단백%원핵표체
脂肪酸延长酶1(FAE1)是广泛存在于植物中并定位于内质网上的一种能催化脂肪酸碳链延长的酮脂酰CoA合成酶.根据Genbank上已知的植物FAE1基因设计引物,以从甘蓝型油菜叶片中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,获得了1 380 bp的片段.回收该片段,并连接到pMD18-T载体测序.序列比对结果说明了该片段与植物中已知的FAE1序列有极高的相似性,并且不存在内含子序列.将该片段通过高保真酶扩增,EcoR Ⅰ酶切消化后定向克隆到pGEX-2T表达载体中,在IPTG诱导下于28℃表达出Mr76×103的蛋白质条带.用兔抗GST多克隆抗体做第一抗体进行Western-blot检测,并获得阳性检测结果.这为甘蓝型油菜脂肪酸链延长酶基因FAE1功能的进一步研究奠定了基础.图4表1参14
脂肪痠延長酶1(FAE1)是廣汎存在于植物中併定位于內質網上的一種能催化脂肪痠碳鏈延長的酮脂酰CoA閤成酶.根據Genbank上已知的植物FAE1基因設計引物,以從甘藍型油菜葉片中提取的總DNA為模闆,進行PCR擴增,穫得瞭1 380 bp的片段.迴收該片段,併連接到pMD18-T載體測序.序列比對結果說明瞭該片段與植物中已知的FAE1序列有極高的相似性,併且不存在內含子序列.將該片段通過高保真酶擴增,EcoR Ⅰ酶切消化後定嚮剋隆到pGEX-2T錶達載體中,在IPTG誘導下于28℃錶達齣Mr76×103的蛋白質條帶.用兔抗GST多剋隆抗體做第一抗體進行Western-blot檢測,併穫得暘性檢測結果.這為甘藍型油菜脂肪痠鏈延長酶基因FAE1功能的進一步研究奠定瞭基礎.圖4錶1參14
지방산연장매1(FAE1)시엄범존재우식물중병정위우내질망상적일충능최화지방산탄련연장적동지선CoA합성매.근거Genbank상이지적식물FAE1기인설계인물,이종감람형유채협편중제취적총DNA위모판,진행PCR확증,획득료1 380 bp적편단.회수해편단,병련접도pMD18-T재체측서.서렬비대결과설명료해편단여식물중이지적FAE1서렬유겁고적상사성,병차불존재내함자서렬.장해편단통과고보진매확증,EcoR Ⅰ매절소화후정향극륭도pGEX-2T표체재체중,재IPTG유도하우28℃표체출Mr76×103적단백질조대.용토항GST다극륭항체주제일항체진행Western-blot검측,병획득양성검측결과.저위감람형유채지방산련연장매기인FAE1공능적진일보연구전정료기출.도4표1삼14
