CAJ | 학술논문

比较两种血清型的腺病毒伴随病毒(Adeno-associated virus,AAV)载体携带HIV-1 gag基因肌肉注射诱导小鼠免疫反应的特点.分别制备携带EGFP和HIV-1 gag基因的重组AAV2/1(AAV1)和AAV2载体.小鼠肌肉注射rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP,观察注射局部EGFP的表达.将rAAV1-gag和rAAV2-gag分别以0、3周初免/加强方式肌肉注射免疫BALB/c小鼠以及新西兰白兔.ELISA法检测抗HIV-1 Gag P24蛋白的特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测Gag特异性的CTL反应.结果表明,rAAV1-EGFP在小鼠肌肉的表达强度显著高于rAAV2-EGFP;用Western blot法和间接免疫荧光法检测rAAV1-gag和rAAV2-gag体外转染的293细胞,均可检测到HIV-1 Gag蛋白的表达;在小鼠体内rAAV1-gag和rAAV2-gag组均可检测到特异性P24抗体,抗体滴度rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组;而无论rAAV1-gag组还是rAAV2-gag组,特异性CTL反应均较低,与阴性对照组相比均无显著性差异;两种载体免疫兔子也都可检测到特异性P24抗体,同样地,rAAV1-gag组显著高于rAAV2-gag组.结论:携带HIV-1 gag基因的rAAV1或rAAV2以肌肉注射方式免疫小鼠主要诱导特异Gag的体液免疫反应;且rAAV1可诱导很强的抗HIV-1 Gag特异性抗体,抗体水平显著高于rAAV2.
비교량충혈청형적선병독반수병독(Adeno-associated virus,AAV)재체휴대HIV-1 gag기인기육주사유도소서면역반응적특점.분별제비휴대EGFP화HIV-1 gag기인적중조AAV2/1(AAV1)화AAV2재체.소서기육주사rAAV1-EGFP화rAAV2-EGFP,관찰주사국부EGFP적표체.장rAAV1-gag화rAAV2-gag분별이0、3주초면/가강방식기육주사면역BALB/c소서이급신서란백토.ELISA법검측항HIV-1 Gag P24단백적특이성항체,세포내세포인자염색법검측Gag특이성적CTL반응.결과표명,rAAV1-EGFP재소서기육적표체강도현저고우rAAV2-EGFP;용Western blot법화간접면역형광법검측rAAV1-gag화rAAV2-gag체외전염적293세포,균가검측도HIV-1 Gag단백적표체;재소서체내rAAV1-gag화rAAV2-gag조균가검측도특이성P24항체,항체적도rAAV1-gag조현저고우rAAV2-gag조;이무론rAAV1-gag조환시rAAV2-gag조,특이성CTL반응균교저,여음성대조조상비균무현저성차이;량충재체면역토자야도가검측도특이성P24항체,동양지,rAAV1-gag조현저고우rAAV2-gag조.결론:휴대HIV-1 gag기인적rAAV1혹rAAV2이기육주사방식면역소서주요유도특이Gag적체액면역반응;차rAAV1가유도흔강적항HIV-1 Gag특이성항체,항체수평현저고우rAAV2.