第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2007年
9期
855-857
,共3页
Cbfa1基因%RNA干扰%人牙周膜细胞
Cbfa1基因%RNA榦擾%人牙週膜細胞
Cbfa1기인%RNA간우%인아주막세포
目的:构建针对核心结合因子a1(Cbfa1)的mU6小干扰RNA载体,并将其转染到人牙周膜细胞hPDLCs,观察其干扰效果,以期建立稳定的低表达Cbfa1基因的hPDLCs模型. 方法:设计针对Cbfa1基因编码区的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经双酶切线性化的小干扰载体mU6中,对重组质粒进行酶切分析和DNA序列测定. 以脂质体法将mU6空载体和重组质粒分别导人hPDLCs细胞系. 用含G418的培养液筛选,挑取阳性克隆后用RT-PCR技术检测各hPDLCs克隆内Cbfa1 mRNA水平的表达情况. 结果:经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒Cbfa1-siRNA中插入的目的基因片段与预计片段完全一致. G418筛选转染细胞4wk后获得稳定转染mU6空载体的细胞克隆株hPDLCs-mU6和稳定转染重组质粒的细胞克隆株hPDLCs-siRNA. 经RT-PCR鉴定,Cbfa1在hPDLCs-siRNA细胞中的表达比对照细胞明显降低. 结论:成功构建了针对Cbfa1的小干扰RNA载体,成功建立了稳定的低表达Cbfa1的hPDLCs模型,为进一步研究Cbfa1的功能奠定了实验基础.
目的:構建針對覈心結閤因子a1(Cbfa1)的mU6小榦擾RNA載體,併將其轉染到人牙週膜細胞hPDLCs,觀察其榦擾效果,以期建立穩定的低錶達Cbfa1基因的hPDLCs模型. 方法:設計針對Cbfa1基因編碼區的寡覈苷痠鏈,體外退火後剋隆入經雙酶切線性化的小榦擾載體mU6中,對重組質粒進行酶切分析和DNA序列測定. 以脂質體法將mU6空載體和重組質粒分彆導人hPDLCs細胞繫. 用含G418的培養液篩選,挑取暘性剋隆後用RT-PCR技術檢測各hPDLCs剋隆內Cbfa1 mRNA水平的錶達情況. 結果:經酶切鑒定及DNA測序,重組質粒Cbfa1-siRNA中插入的目的基因片段與預計片段完全一緻. G418篩選轉染細胞4wk後穫得穩定轉染mU6空載體的細胞剋隆株hPDLCs-mU6和穩定轉染重組質粒的細胞剋隆株hPDLCs-siRNA. 經RT-PCR鑒定,Cbfa1在hPDLCs-siRNA細胞中的錶達比對照細胞明顯降低. 結論:成功構建瞭針對Cbfa1的小榦擾RNA載體,成功建立瞭穩定的低錶達Cbfa1的hPDLCs模型,為進一步研究Cbfa1的功能奠定瞭實驗基礎.
목적:구건침대핵심결합인자a1(Cbfa1)적mU6소간우RNA재체,병장기전염도인아주막세포hPDLCs,관찰기간우효과,이기건립은정적저표체Cbfa1기인적hPDLCs모형. 방법:설계침대Cbfa1기인편마구적과핵감산련,체외퇴화후극륭입경쌍매절선성화적소간우재체mU6중,대중조질립진행매절분석화DNA서렬측정. 이지질체법장mU6공재체화중조질립분별도인hPDLCs세포계. 용함G418적배양액사선,도취양성극륭후용RT-PCR기술검측각hPDLCs극륭내Cbfa1 mRNA수평적표체정황. 결과:경매절감정급DNA측서,중조질립Cbfa1-siRNA중삽입적목적기인편단여예계편단완전일치. G418사선전염세포4wk후획득은정전염mU6공재체적세포극륭주hPDLCs-mU6화은정전염중조질립적세포극륭주hPDLCs-siRNA. 경RT-PCR감정,Cbfa1재hPDLCs-siRNA세포중적표체비대조세포명현강저. 결론:성공구건료침대Cbfa1적소간우RNA재체,성공건립료은정적저표체Cbfa1적hPDLCs모형,위진일보연구Cbfa1적공능전정료실험기출.
