中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2007年
6期
469-473
,共5页
黄银霞%韩俊%韩露%董辰方%高晨%王小凡%周伟%董小平
黃銀霞%韓俊%韓露%董辰方%高晨%王小凡%週偉%董小平
황은하%한준%한로%동신방%고신%왕소범%주위%동소평
退行性疾病%免疫共沉淀%pull down%蛋白相互作用%α-synuclein%14-3-3蛋白
退行性疾病%免疫共沉澱%pull down%蛋白相互作用%α-synuclein%14-3-3蛋白
퇴행성질병%면역공침정%pull down%단백상호작용%α-synuclein%14-3-3단백
帕金森病(Parkinson's disease,PD)涉及两种蛋白--α-synuclein蛋白(SNCP)与14-3-3蛋白.通过重组,将这两种蛋白在大肠杆菌DH5α中表达,通过谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析将其纯化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶对纯化的融合蛋白GST-SNCP切割,再经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析获得SNCP.通过免疫共沉淀、GST pull down和ELISA等技术,证明SNCP能够与14-3-3蛋白结合;为了进一步证明SNCP也与在脑组织中的天然14-3-3蛋白发生作用,利用His pull down方法进行实验.结果证明,SNCP能够和脑组织中的14-3-3蛋白发生相互作用.这些结果从分子水平提供了SNCP与14-3-3蛋白相互作用的实验证据,为进一步了解SNCP的结构和功能,及其在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
帕金森病(Parkinson's disease,PD)涉及兩種蛋白--α-synuclein蛋白(SNCP)與14-3-3蛋白.通過重組,將這兩種蛋白在大腸桿菌DH5α中錶達,通過穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析將其純化,得到GST-14-3-3蛋白;利用凝血酶對純化的融閤蛋白GST-SNCP切割,再經穀胱甘肽-Sepharose 4B親和層析穫得SNCP.通過免疫共沉澱、GST pull down和ELISA等技術,證明SNCP能夠與14-3-3蛋白結閤;為瞭進一步證明SNCP也與在腦組織中的天然14-3-3蛋白髮生作用,利用His pull down方法進行實驗.結果證明,SNCP能夠和腦組織中的14-3-3蛋白髮生相互作用.這些結果從分子水平提供瞭SNCP與14-3-3蛋白相互作用的實驗證據,為進一步瞭解SNCP的結構和功能,及其在中樞神經繫統退行性疾病的作用提供瞭必要的實驗基礎.
파금삼병(Parkinson's disease,PD)섭급량충단백--α-synuclein단백(SNCP)여14-3-3단백.통과중조,장저량충단백재대장간균DH5α중표체,통과곡광감태-Sepharose 4B친화층석장기순화,득도GST-14-3-3단백;이용응혈매대순화적융합단백GST-SNCP절할,재경곡광감태-Sepharose 4B친화층석획득SNCP.통과면역공침정、GST pull down화ELISA등기술,증명SNCP능구여14-3-3단백결합;위료진일보증명SNCP야여재뇌조직중적천연14-3-3단백발생작용,이용His pull down방법진행실험.결과증명,SNCP능구화뇌조직중적14-3-3단백발생상호작용.저사결과종분자수평제공료SNCP여14-3-3단백상호작용적실험증거,위진일보료해SNCP적결구화공능,급기재중추신경계통퇴행성질병적작용제공료필요적실험기출.
