生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2008年
5期
512-520
,共9页
李娜%张英涛%薛丽香%童坦君
李娜%張英濤%薛麗香%童坦君
리나%장영도%설려향%동탄군
ING1%p16INK4a%p53%PHD结构域
ING1%p16INK4a%p53%PHD結構域
ING1%p16INK4a%p53%PHD결구역
ING1(inhibitor of growth 1)是一个候选抑癌基因家族,p47ING1a、p33ING1b和p24ING1c是其三种剪接异构体.通过MTT法和流式细胞术研究ING1a、ING1b和ING1c对HeLa细胞增殖的影响,结果发现三者均可将HeLa细胞阻滞于G0/G1期并抑制细胞生长.采用PCR方法构建ING1a和ING1b的PHD结构域缺失体1aΔC和1bΔC,进而使ING1a,ING1b、ING1c、1aΔC和1bΔC在HeLa细胞中过表达.采用Western blot检测上述HeLa细胞中p16INK4a、PTEN/p27Kip1和p53/p21Waf1的表达变化,结果发现ING1a、ING1b、ING1c和1aΔC均可促进p16INK4a的表达,其中ING1c的促进作用最为显著,1bΔC则略微抑制了p16INK4a的蛋白质表达.利用荧光素酶分析初步确定1aΔC可增强p16INK4a启动子活性而促进p16INK4a的转录,1bΔC则抑制了p16INK4a启动子活性.上述结果阐释了ING1家族各成员对HeLa细胞增殖的影响及其分子机制,从而确定了各异构体功能的异同及它们所调控的重要基因.首次发现除p53/p21Waf1通路外,ING1家族各异构体还可通过上调p16INK4a和PTEN的表达而抑制肿瘤细胞生长,并且ING1a的PHD结构域删除体可以增强p16INK4a的转录,这为研究ING1家族抑制肿瘤细胞生长的分子机制提供了新的线索.
ING1(inhibitor of growth 1)是一箇候選抑癌基因傢族,p47ING1a、p33ING1b和p24ING1c是其三種剪接異構體.通過MTT法和流式細胞術研究ING1a、ING1b和ING1c對HeLa細胞增殖的影響,結果髮現三者均可將HeLa細胞阻滯于G0/G1期併抑製細胞生長.採用PCR方法構建ING1a和ING1b的PHD結構域缺失體1aΔC和1bΔC,進而使ING1a,ING1b、ING1c、1aΔC和1bΔC在HeLa細胞中過錶達.採用Western blot檢測上述HeLa細胞中p16INK4a、PTEN/p27Kip1和p53/p21Waf1的錶達變化,結果髮現ING1a、ING1b、ING1c和1aΔC均可促進p16INK4a的錶達,其中ING1c的促進作用最為顯著,1bΔC則略微抑製瞭p16INK4a的蛋白質錶達.利用熒光素酶分析初步確定1aΔC可增彊p16INK4a啟動子活性而促進p16INK4a的轉錄,1bΔC則抑製瞭p16INK4a啟動子活性.上述結果闡釋瞭ING1傢族各成員對HeLa細胞增殖的影響及其分子機製,從而確定瞭各異構體功能的異同及它們所調控的重要基因.首次髮現除p53/p21Waf1通路外,ING1傢族各異構體還可通過上調p16INK4a和PTEN的錶達而抑製腫瘤細胞生長,併且ING1a的PHD結構域刪除體可以增彊p16INK4a的轉錄,這為研究ING1傢族抑製腫瘤細胞生長的分子機製提供瞭新的線索.
ING1(inhibitor of growth 1)시일개후선억암기인가족,p47ING1a、p33ING1b화p24ING1c시기삼충전접이구체.통과MTT법화류식세포술연구ING1a、ING1b화ING1c대HeLa세포증식적영향,결과발현삼자균가장HeLa세포조체우G0/G1기병억제세포생장.채용PCR방법구건ING1a화ING1b적PHD결구역결실체1aΔC화1bΔC,진이사ING1a,ING1b、ING1c、1aΔC화1bΔC재HeLa세포중과표체.채용Western blot검측상술HeLa세포중p16INK4a、PTEN/p27Kip1화p53/p21Waf1적표체변화,결과발현ING1a、ING1b、ING1c화1aΔC균가촉진p16INK4a적표체,기중ING1c적촉진작용최위현저,1bΔC칙략미억제료p16INK4a적단백질표체.이용형광소매분석초보학정1aΔC가증강p16INK4a계동자활성이촉진p16INK4a적전록,1bΔC칙억제료p16INK4a계동자활성.상술결과천석료ING1가족각성원대HeLa세포증식적영향급기분자궤제,종이학정료각이구체공능적이동급타문소조공적중요기인.수차발현제p53/p21Waf1통로외,ING1가족각이구체환가통과상조p16INK4a화PTEN적표체이억제종류세포생장,병차ING1a적PHD결구역산제체가이증강p16INK4a적전록,저위연구ING1가족억제종류세포생장적분자궤제제공료신적선색.
