果树学报
果樹學報
과수학보
JOURNAL OF FRUIT SCIENCE
2008年
4期
577-580
,共4页
李桂琴%李会宣%许冬倩%刘坤%张玉星
李桂琴%李會宣%許鼕倩%劉坤%張玉星
리계금%리회선%허동천%류곤%장옥성
鸭梨%多酚氧化酶%基因克隆%表达
鴨梨%多酚氧化酶%基因剋隆%錶達
압리%다분양화매%기인극륭%표체
以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果皮基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶(polyphenol oxi-dase,PPO)基因保守序列设计引物,利用PCR技术,克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列,将此核酸序列克隆到载体pGEM-T,酶切鉴定后测序,结果表明该段序列含有1 782个核苷酸,编码593个氨基酸.对鸭梨多酚氧化酶基因片段的一致性分析和进化树分析表明,该片段与沙梨(Pyrus pyrifolia,AB056680)、苹果(Mdus domestica,L29450)、李(Prunus salicina,AY866432)以及杏(Prunus armeniaca,AF020786)的一致性分别为99％、96.3％、82％和51.4％,绘制的进化树和形态学分类地位相一致.将该片段连接到表达载体pET39b上,获得的重组子命名为pET39b-PPO,热激法转化表达受体大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG进行诱导.SDS-PAGE分析表明,PPO基因在大肠杆菌中被诱导表达蛋白质相对分子质量约66 ku,检测表明具有多酚氧化酶的活性.
以鴨梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果皮基因組DNA為模闆,根據已經髮錶的多酚氧化酶(polyphenol oxi-dase,PPO)基因保守序列設計引物,利用PCR技術,剋隆得到鴨梨多酚氧化酶編碼區序列,將此覈痠序列剋隆到載體pGEM-T,酶切鑒定後測序,結果錶明該段序列含有1 782箇覈苷痠,編碼593箇氨基痠.對鴨梨多酚氧化酶基因片段的一緻性分析和進化樹分析錶明,該片段與沙梨(Pyrus pyrifolia,AB056680)、蘋果(Mdus domestica,L29450)、李(Prunus salicina,AY866432)以及杏(Prunus armeniaca,AF020786)的一緻性分彆為99％、96.3％、82％和51.4％,繪製的進化樹和形態學分類地位相一緻.將該片段連接到錶達載體pET39b上,穫得的重組子命名為pET39b-PPO,熱激法轉化錶達受體大腸桿菌BL21(DE3)菌株,用IPTG進行誘導.SDS-PAGE分析錶明,PPO基因在大腸桿菌中被誘導錶達蛋白質相對分子質量約66 ku,檢測錶明具有多酚氧化酶的活性.
이압리(Pyrus bretschneideri Rehd.)과피기인조DNA위모판,근거이경발표적다분양화매(polyphenol oxi-dase,PPO)기인보수서렬설계인물,이용PCR기술,극륭득도압리다분양화매편마구서렬,장차핵산서렬극륭도재체pGEM-T,매절감정후측서,결과표명해단서렬함유1 782개핵감산,편마593개안기산.대압리다분양화매기인편단적일치성분석화진화수분석표명,해편단여사리(Pyrus pyrifolia,AB056680)、평과(Mdus domestica,L29450)、리(Prunus salicina,AY866432)이급행(Prunus armeniaca,AF020786)적일치성분별위99％、96.3％、82％화51.4％,회제적진화수화형태학분류지위상일치.장해편단련접도표체재체pET39b상,획득적중조자명명위pET39b-PPO,열격법전화표체수체대장간균BL21(DE3)균주,용IPTG진행유도.SDS-PAGE분석표명,PPO기인재대장간균중피유도표체단백질상대분자질량약66 ku,검측표명구유다분양화매적활성.
