重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2008年
7期
784-787
,共4页
郐莉%江涌%孙晓川%郑履平
鄶莉%江湧%孫曉川%鄭履平
회리%강용%손효천%정리평
载脂蛋白E%等位基因%基因克隆%真核表达
載脂蛋白E%等位基因%基因剋隆%真覈錶達
재지단백E%등위기인%기인극륭%진핵표체
目的:克隆人载脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)ε3等位基因,测定序列,并构建带有人源性APOEε3等位基因的真核表达载体.方法:通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从人胎儿脑组织中克隆得到APOEε3等位基因,与PMD19-T载体连接,再酶切PMDl9-T-APOE ε3,获得APOEε3基因,然后将其与表达载体pEGFP-N1连接,构建pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体.重组质粒转染293T细胞后,在荧光显微镜下观察EGFP的表达,并用Western-Blot的方法检测目的蛋白在293T细胞中的表达.结果:经酶切和DNA测序证明APOEε3基冈序列正确,真核表达载体构建成功.将重组质粒转染293T细胞,在转染后的细胞中检测到目的蛋白的表达.结论:成功构建了pEGFP-N1-APOEε3真核表达载体,该表达载体能在真核细胞中正确表达.
目的:剋隆人載脂蛋白E(Apolipoprotein E,APOE)ε3等位基因,測定序列,併構建帶有人源性APOEε3等位基因的真覈錶達載體.方法:通過逆轉錄聚閤酶鏈式反應(RT-PCR)從人胎兒腦組織中剋隆得到APOEε3等位基因,與PMD19-T載體連接,再酶切PMDl9-T-APOE ε3,穫得APOEε3基因,然後將其與錶達載體pEGFP-N1連接,構建pEGFP-N1-APOEε3真覈錶達載體.重組質粒轉染293T細胞後,在熒光顯微鏡下觀察EGFP的錶達,併用Western-Blot的方法檢測目的蛋白在293T細胞中的錶達.結果:經酶切和DNA測序證明APOEε3基岡序列正確,真覈錶達載體構建成功.將重組質粒轉染293T細胞,在轉染後的細胞中檢測到目的蛋白的錶達.結論:成功構建瞭pEGFP-N1-APOEε3真覈錶達載體,該錶達載體能在真覈細胞中正確錶達.
목적:극륭인재지단백E(Apolipoprotein E,APOE)ε3등위기인,측정서렬,병구건대유인원성APOEε3등위기인적진핵표체재체.방법:통과역전록취합매련식반응(RT-PCR)종인태인뇌조직중극륭득도APOEε3등위기인,여PMD19-T재체련접,재매절PMDl9-T-APOE ε3,획득APOEε3기인,연후장기여표체재체pEGFP-N1련접,구건pEGFP-N1-APOEε3진핵표체재체.중조질립전염293T세포후,재형광현미경하관찰EGFP적표체,병용Western-Blot적방법검측목적단백재293T세포중적표체.결과:경매절화DNA측서증명APOEε3기강서렬정학,진핵표체재체구건성공.장중조질립전염293T세포,재전염후적세포중검측도목적단백적표체.결론:성공구건료pEGFP-N1-APOEε3진핵표체재체,해표체재체능재진핵세포중정학표체.
