中国老年学杂志
中國老年學雜誌
중국노년학잡지
CHINESE JOURNAL OF GERONTOLOGY
2008年
18期
1790-1792
,共3页
林平%邹海峰%于靖%边淑玲%刘紫君%于晓光
林平%鄒海峰%于靖%邊淑玲%劉紫君%于曉光
림평%추해봉%우정%변숙령%류자군%우효광
CGRP%CGRP-VY%克隆表达
CGRP%CGRP-VY%剋隆錶達
CGRP%CGRP-VY%극륭표체
目的 利用基因工程方法获得降钙素基因相关肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),并初步鉴定其生物学活性.方法 以pET-CGRP重组质粒为模板,用PCR方法扩增编码CGRP-VY的基因片段,将该基因片段定向克隆到pET-32a(+)载体上,构建pET-CGRP-VY重组质粒,转化E.coli JM109菌株,经扩增提取重组质粒,酶切和测序鉴定;将鉴定正确的重组质粒pET-CGRP-VY转化E.coli BL21trxB(DE3)pLysS菌株,经IPTG诱导后,收集并裂解菌体,SDS-PAGE电泳检测蛋白的表达;通过粗提物扩张蟾蜍肠系膜微循环血管实验,初步鉴定CGRP-VY扩张血管的活性,并与重组CGRP进行活性比较.结果 获得了含有CGRP成熟肽编码基因序列(111 bp)及缬氨酸和亮氨酸的密码子序列(6 bp)的重组质粒pET-CGRP-VY,符合预期结果;经诱导后在E.coli中表达出21.2kD的融合蛋白,初步证明其粗提物具有扩张血管的功能.结论 成功获得具有生物学活性的融合蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),为进一步进行其降血压功能研究奠定了实验基础.
目的 利用基因工程方法穫得降鈣素基因相關肽(CGRP)的衍生物(CGRP-VY),併初步鑒定其生物學活性.方法 以pET-CGRP重組質粒為模闆,用PCR方法擴增編碼CGRP-VY的基因片段,將該基因片段定嚮剋隆到pET-32a(+)載體上,構建pET-CGRP-VY重組質粒,轉化E.coli JM109菌株,經擴增提取重組質粒,酶切和測序鑒定;將鑒定正確的重組質粒pET-CGRP-VY轉化E.coli BL21trxB(DE3)pLysS菌株,經IPTG誘導後,收集併裂解菌體,SDS-PAGE電泳檢測蛋白的錶達;通過粗提物擴張蟾蜍腸繫膜微循環血管實驗,初步鑒定CGRP-VY擴張血管的活性,併與重組CGRP進行活性比較.結果 穫得瞭含有CGRP成熟肽編碼基因序列(111 bp)及纈氨痠和亮氨痠的密碼子序列(6 bp)的重組質粒pET-CGRP-VY,符閤預期結果;經誘導後在E.coli中錶達齣21.2kD的融閤蛋白,初步證明其粗提物具有擴張血管的功能.結論 成功穫得具有生物學活性的融閤蛋白CGRP衍生物(CGRP-VY),為進一步進行其降血壓功能研究奠定瞭實驗基礎.
목적 이용기인공정방법획득강개소기인상관태(CGRP)적연생물(CGRP-VY),병초보감정기생물학활성.방법 이pET-CGRP중조질립위모판,용PCR방법확증편마CGRP-VY적기인편단,장해기인편단정향극륭도pET-32a(+)재체상,구건pET-CGRP-VY중조질립,전화E.coli JM109균주,경확증제취중조질립,매절화측서감정;장감정정학적중조질립pET-CGRP-VY전화E.coli BL21trxB(DE3)pLysS균주,경IPTG유도후,수집병렬해균체,SDS-PAGE전영검측단백적표체;통과조제물확장섬서장계막미순배혈관실험,초보감정CGRP-VY확장혈관적활성,병여중조CGRP진행활성비교.결과 획득료함유CGRP성숙태편마기인서렬(111 bp)급힐안산화량안산적밀마자서렬(6 bp)적중조질립pET-CGRP-VY,부합예기결과;경유도후재E.coli중표체출21.2kD적융합단백,초보증명기조제물구유확장혈관적공능.결론 성공획득구유생물학활성적융합단백CGRP연생물(CGRP-VY),위진일보진행기강혈압공능연구전정료실험기출.
