康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达
강씨목매섬유소매CBHI기인극륭급재대장간균중적표체
Cloning of CBHI gene of Trichoderma koningii cellulase and expression in Escherichia coli
  • 万方数据
    中国酿造 중국양조
    CHINA BREWING
    2011年 2期 76-80 ,共5页

    黄时海%康超%黄飞%曹喜秀%何鑫平%汪晟%吴孔阳%曹普美%梁智群%李湘萍

    황시해%강초%황비%조희수%하흠평%왕성%오공양%조보미%량지군%리상평

    康氏木霉%纤维二糖水解酶Ⅰ%cbhI基因%克隆表达 康氏木黴%纖維二糖水解酶Ⅰ%cbhI基因%剋隆錶達
    강씨목매%섬유이당수해매Ⅰ%cbhI기인%극륭표체
    将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT-PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶Ⅰ(cbh I)基因.cbhI基因经测序确认后克降到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白.实验结果:cbhI基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.0,Mn2+对酶活力有明显的促进作用,SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为70kDa.
    장강씨목매(Trichoderma koningii)총RNA반전록성cDNA제일련,병이지위모판진행RT-PCR,합성약1.5kb적섬유이당수해매Ⅰ(cbh I)기인.cbhI기인경측서학인후극강도표체재체pET-30a(+)상,PCR화쌍매절감정사선양성중조자;장양성질립전화대장간균BL21(DE3)plysS,병용0.4mmol/L적IPTG유도표체중조단백.실험결과:cbhI기인재BL21(DE3)plysS중포내융합표체,중조단백pNPC매활위15.6U/L,최괄반응온도위45℃,최괄pH치위5.0,Mn2+대매활력유명현적촉진작용,SDS-PAGE표명중조단백분자량약위70kDa.
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