中华实验和临床病毒学杂志
中華實驗和臨床病毒學雜誌
중화실험화림상병독학잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL AND CLINICAL VIROLOGY
2012年
1期
66-69
,共4页
牛建丽%邢辉%廖玲洁%钟平%马鹏飞%王允琮%赵全壁%邵一鸣
牛建麗%邢輝%廖玲潔%鐘平%馬鵬飛%王允琮%趙全壁%邵一鳴
우건려%형휘%료령길%종평%마붕비%왕윤종%조전벽%소일명
抗病毒治疗%病毒载量%基因型%聚合酶链反应
抗病毒治療%病毒載量%基因型%聚閤酶鏈反應
항병독치료%병독재량%기인형%취합매련반응
Anti-retroviral therapy%Viral load%Genotype%Polymerase chain reaction
目的 研究针对中国主要HIV-1流行株优化的实验室自建耐药基因型实验室自建检测方法( in-house)的扩增效果及检测敏感度.方法 选取中国主要流行亚型的B、CRF07 _BC、CRF01_AE亚型各10份样本,这些样本为2007 -2009年本实验室采集采自河南、新疆、湖南三地已接受抗病毒治疗患者的样本,并已确定亚型.选用生物梅里埃公司的Nuclisens Easy Q方法对选取的30份样本的病毒载量平行进行3次病毒载量检测,取平均值作为载量数值.对每份样本用HIV阴性血浆进行5个浓度的梯度稀释,稀释为＞ 1000、401～1000、101 ～400、50 ～100和＜50拷贝/ml 5个浓度梯度.提取核酸后,进行RT-PCR和巢式PCR扩增,对扩增结果进行统计扩增结果,确定每种亚型的扩增效果和最低检测限.随机选取12份样本的初浓度和最低浓度进行测序,对测序结果进行耐药结果分析和序列一致性分析.结果 所选样本的病毒载量介于2.03×102 ～5.92×104拷贝/ml之间.自建的In-house法对载量50 ～1000拷贝/ml范围的样本仍可达到较高的扩增效果(86％).样本稀释前后耐药位点相似,序列一致性在97％以上,在低病毒载量时优势病毒株的检测则更敏感.结论 自建的实验室方法的灵敏度较高,对低病毒载量水平的样本仍有较高的扩增效果.
目的 研究針對中國主要HIV-1流行株優化的實驗室自建耐藥基因型實驗室自建檢測方法( in-house)的擴增效果及檢測敏感度.方法 選取中國主要流行亞型的B、CRF07 _BC、CRF01_AE亞型各10份樣本,這些樣本為2007 -2009年本實驗室採集採自河南、新疆、湖南三地已接受抗病毒治療患者的樣本,併已確定亞型.選用生物梅裏埃公司的Nuclisens Easy Q方法對選取的30份樣本的病毒載量平行進行3次病毒載量檢測,取平均值作為載量數值.對每份樣本用HIV陰性血漿進行5箇濃度的梯度稀釋,稀釋為＞ 1000、401～1000、101 ～400、50 ～100和＜50拷貝/ml 5箇濃度梯度.提取覈痠後,進行RT-PCR和巢式PCR擴增,對擴增結果進行統計擴增結果,確定每種亞型的擴增效果和最低檢測限.隨機選取12份樣本的初濃度和最低濃度進行測序,對測序結果進行耐藥結果分析和序列一緻性分析.結果 所選樣本的病毒載量介于2.03×102 ～5.92×104拷貝/ml之間.自建的In-house法對載量50 ～1000拷貝/ml範圍的樣本仍可達到較高的擴增效果(86％).樣本稀釋前後耐藥位點相似,序列一緻性在97％以上,在低病毒載量時優勢病毒株的檢測則更敏感.結論 自建的實驗室方法的靈敏度較高,對低病毒載量水平的樣本仍有較高的擴增效果.
목적 연구침대중국주요HIV-1류행주우화적실험실자건내약기인형실험실자건검측방법( in-house)적확증효과급검측민감도.방법 선취중국주요류행아형적B、CRF07 _BC、CRF01_AE아형각10빈양본,저사양본위2007 -2009년본실험실채집채자하남、신강、호남삼지이접수항병독치료환자적양본,병이학정아형.선용생물매리애공사적Nuclisens Easy Q방법대선취적30빈양본적병독재량평행진행3차병독재량검측,취평균치작위재량수치.대매빈양본용HIV음성혈장진행5개농도적제도희석,희석위＞ 1000、401～1000、101 ～400、50 ～100화＜50고패/ml 5개농도제도.제취핵산후,진행RT-PCR화소식PCR확증,대확증결과진행통계확증결과,학정매충아형적확증효과화최저검측한.수궤선취12빈양본적초농도화최저농도진행측서,대측서결과진행내약결과분석화서렬일치성분석.결과 소선양본적병독재량개우2.03×102 ～5.92×104고패/ml지간.자건적In-house법대재량50 ～1000고패/ml범위적양본잉가체도교고적확증효과(86％).양본희석전후내약위점상사,서렬일치성재97％이상,재저병독재량시우세병독주적검측칙경민감.결론 자건적실험실방법적령민도교고,대저병독재량수평적양본잉유교고적확증효과.
Objective To evaluate the amplification rate and the lowestlower detection limit of an in-house HIV-1 Drug resistant (HIVDR) genotyping test.Methods A total of 30 plasma samples were selected,which covered allmajor HIV-1 subtypes predominating prevailing in china (B',CRF07_BC,CRF01 _AE ).The viral loads of the 30 selected samples were detected in triplicate by Easy Q method and the average values were taken as the viral loads of the samples.Each sample was diluted to the concentration of ＞ 1000copies/ml,401-1000 copies/ml,101-400 copies/ml,50-100 copies/ml and ＜ 50 copies/ml with HIV-negative plasma. After extraction of nucleic acids, RT-PCR and nested PCR amplification were performed,the efficiency of amplification of each subtype and the minimum detection limit were determined statistically based on the PCR results.Results The viral loads of the selected samples ranged from 2.03 × 102 - 5.92 × 104 copies/ml.The sample of 50 - 1000 copies/ml have a high amplification rate (86％).Conclusion The In-house method for HIV-1 drug resistance genotyping has a high sensitivity with a high successful amplification rate,especially in the samples with low viral load.This method can be used to the detectionof drug-resistant virus and to provide scientific data to treatment options for patients.
