CAJ | 학술논문

[目的]研究凋亡与非凋亡大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neuron,CGN)细胞中基因表达的差异,克隆出与大鼠CGN凋亡相关的基因.[方法]用荧光差异显示聚合酶链反应(florescent differential display polymerase chain reaction,FDD PCR)从低钾诱导的大鼠CGN凋亡模型中筛选出差异表达序列标签(expressed sequence tag,EST),反向Northern blot杂交进一步验证后,用cDNA 5′末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA 5′Ends,5′RACE)克隆差异表达EST的目标基因,用RT-PCR及Western blot进一步验证目标基因mRNA 及蛋白质水平的表达差异.[结果]用FDD PCR筛选出5号差异表达EST,经反向Northern blot验证后,用5′RACE法成功地克隆到5号EST完整开放阅码框,序列同源性分析证实为大鼠基因ARNT2,RT-PCR及Western blot证实低钾诱导后ARNT2mRNA与蛋白质水平的表达均显著地上调,统计学分析显示差异有显著性(P<0.001).[结论]ARNT2在低钾诱导的大鼠凋亡CGN中表达上调,提示ARNT2与CGN凋亡相关并在该过程中发挥重要作用.
[목적]연구조망여비조망대서소뇌과립신경원(cerebellar granule neuron,CGN)세포중기인표체적차이,극륭출여대서CGN조망상관적기인.[방법]용형광차이현시취합매련반응(florescent differential display polymerase chain reaction,FDD PCR)종저갑유도적대서CGN조망모형중사선출차이표체서렬표첨(expressed sequence tag,EST),반향Northern blot잡교진일보험증후,용cDNA 5′말단쾌속확증기술(rapid amplification of cDNA 5′Ends,5′RACE)극륭차이표체EST적목표기인,용RT-PCR급Western blot진일보험증목표기인mRNA 급단백질수평적표체차이.[결과]용FDD PCR사선출5호차이표체EST,경반향Northern blot험증후,용5′RACE법성공지극륭도5호EST완정개방열마광,서렬동원성분석증실위대서기인ARNT2,RT-PCR급Western blot증실저갑유도후ARNT2mRNA여단백질수평적표체균현저지상조,통계학분석현시차이유현저성(P<0.001).[결론]ARNT2재저갑유도적대서조망CGN중표체상조,제시ARNT2여CGN조망상관병재해과정중발휘중요작용.