CAJ | 학술논문

目的:将人α-防御素-1(α-HNP-1)基因与山羊β-乳球蛋白(Beta-Lactoglobulin, BLG)基因5'调控区序列融合,构建α-HNP-1基因的乳腺定位表达载体并对其进行检测.方法:用PCR方法获得α-HNP-1基因片断并克隆于pMD18-T载体,经DNA测序证实α-HNP-1基因序列无误后,再将其亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),构建pcDNA3.1-HNP-1重组质粒.用PCR方法扩增出BLG基因5'区调控序列并克隆到pcDNA3.1-HNP-1中,构建乳腺定位表达载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1,该载体经脂质体包裹后,经乳腺导管注入妊娠中后期大鼠乳腺中进行表达.结果:经酶切鉴定和DNA测序分析证实重组质粒载体pcDNA3.1-BLG-HNP-1构建正确,经ELISA检测,大鼠乳汁中有α-HNP-1表达,其48 h表达量为27.67 ng/ml,72h表达量为49.00 ng/ml.结论:成功构建了α-HNP-1基因乳腺定位表达载体并最终在乳腺获得一定量表达,说明乳腺导管注入法是一种较理想的评价乳腺特异表达载体的可行性方法.
목적:장인α-방어소-1(α-HNP-1)기인여산양β-유구단백(Beta-Lactoglobulin, BLG)기인5'조공구서렬융합,구건α-HNP-1기인적유선정위표체재체병대기진행검측.방법:용PCR방법획득α-HNP-1기인편단병극륭우pMD18-T재체,경DNA측서증실α-HNP-1기인서렬무오후,재장기아극륭도진핵표체재체pcDNA3.1(+),구건pcDNA3.1-HNP-1중조질립.용PCR방법확증출BLG기인5'구조공서렬병극륭도pcDNA3.1-HNP-1중,구건유선정위표체재체pcDNA3.1-BLG-HNP-1,해재체경지질체포과후,경유선도관주입임신중후기대서유선중진행표체.결과:경매절감정화DNA측서분석증실중조질립재체pcDNA3.1-BLG-HNP-1구건정학,경ELISA검측,대서유즙중유α-HNP-1표체,기48 h표체량위27.67 ng/ml,72h표체량위49.00 ng/ml.결론:성공구건료α-HNP-1기인유선정위표체재체병최종재유선획득일정량표체,설명유선도관주입법시일충교이상적평개유선특이표체재체적가행성방법.