CAJ | 학술논문

背景与目的:我们创导的"癌症的靶向双基因-病毒治疗"策略可消灭移植性肿瘤,目前最重要的是要提高其安全性,使其只靶向肿瘤细胞,而在正常细胞内不复制或者很少复制.本研究旨在构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,并研究其安全性;在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,研究其杀伤性.方法:用hTERT启动子控制腺病毒复制必需的E1A基因,并将E1B 55KD基因删除,构建肿瘤特异性的双靶向腺病毒TD55,使其只靶向p53功能缺乏的肿瘤.在TD55中插入凋亡基因TRAIL,构建成TD55-TRAIL,通过分子克隆构建质粒pTD55和pTD55-TRAIL,并与包装腺病毒的大质粒pBHGE3在293细胞中同源重组,得到腺病毒TD55和TD55-TRAIL.构建好的病毒体外感染人胚肺细胞MRC5、WI38,人结肠癌细胞SW620、HCT116、人肺癌细胞A549,分别用结晶紫染色法和MTT法检测其对细胞生长的影响.用流式细胞仪测定肿瘤细胞的凋亡率.结果:结晶紫染色结果和MTT结果表明,双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞MRC5和WI38的杀伤作用比ZD55-TRAIL小很多.病毒复制能力分析表明,单靶向腺病毒在正常细胞中的复制倍数是双靶向腺病毒的3～5倍.TD55和TD55-TRAIL均能引起SW620细胞的凋亡,后者是前者的3.3倍.结论:双靶向腺病毒TD55-TRAIL对正常细胞的安全性比以往所构建的单靶向腺病毒ZD55-TRAIL更好,说明双靶向载体TD55比单靶向载体ZD55靶向性更高,如做为治疗药物可增加安全性,在治疗中可大大增加药物的安全性.携带的TRAIL基因能引起肿瘤细胞的凋亡,杀伤力较TD55增加数倍.
배경여목적:아문창도적"암증적파향쌍기인-병독치료"책략가소멸이식성종류,목전최중요적시요제고기안전성,사기지파향종류세포,이재정상세포내불복제혹자흔소복제.본연구지재구건종류특이성적쌍파향선병독TD55,병연구기안전성;재TD55중삽입조망기인TRAIL,구건성TD55-TRAIL,연구기살상성.방법:용hTERT계동자공제선병독복제필수적E1A기인,병장E1B 55KD기인산제,구건종류특이성적쌍파향선병독TD55,사기지파향p53공능결핍적종류.재TD55중삽입조망기인TRAIL,구건성TD55-TRAIL,통과분자극륭구건질립pTD55화pTD55-TRAIL,병여포장선병독적대질립pBHGE3재293세포중동원중조,득도선병독TD55화TD55-TRAIL.구건호적병독체외감염인배폐세포MRC5、WI38,인결장암세포SW620、HCT116、인폐암세포A549,분별용결정자염색법화MTT법검측기대세포생장적영향.용류식세포의측정종류세포적조망솔.결과:결정자염색결과화MTT결과표명,쌍파향선병독TD55-TRAIL대정상세포MRC5화WI38적살상작용비ZD55-TRAIL소흔다.병독복제능력분석표명,단파향선병독재정상세포중적복제배수시쌍파향선병독적3～5배.TD55화TD55-TRAIL균능인기SW620세포적조망,후자시전자적3.3배.결론:쌍파향선병독TD55-TRAIL대정상세포적안전성비이왕소구건적단파향선병독ZD55-TRAIL경호,설명쌍파향재체TD55비단파향재체ZD55파향성경고,여주위치료약물가증가안전성,재치료중가대대증가약물적안전성.휴대적TRAIL기인능인기종류세포적조망,살상력교TD55증가수배.