南京医科大学学报（自然科学版）
南京醫科大學學報（自然科學版）
남경의과대학학보（자연과학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS NANJING
2007年
8期
831-834,842,封3
,共6页
夏伟%白杨%叶哲伟%曾甫清%邬喻
夏偉%白楊%葉哲偉%曾甫清%鄔喻
하위%백양%협철위%증보청%오유
早幼粒细胞白血病锌指蛋白%重组质粒%绿色荧光蛋白%精原细胞
早幼粒細胞白血病鋅指蛋白%重組質粒%綠色熒光蛋白%精原細胞
조유립세포백혈병자지단백%중조질립%록색형광단백%정원세포
目的:构建真核表达重组质粒pEGFP-N1-PLZF,并了解其在大鼠精原细胞中的融合蛋白表达情况.方法:参考分子克隆技术,采用RT-PCR的方法从大鼠睾丸组织中扩增早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF),将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,并用双酶切、测序进行鉴定;将重组质粒用脂质体转染的方法导入精原细胞中,观察有无荧光的表达及用Western blot检测蛋白表达情况.结果:实验从大鼠睾丸组织中获取了编码plzf基因的全序列cDNA,产生了2 kb的目的插入片段,与pEGFP-N1载体连接后经酶切电泳鉴定及DNA测序证实序列正确;重组质粒转染精原细胞24 h后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,并用Western 1blot:检测到106 kD目的蛋白的表达.结论:新构建的重组质粒pEGFP-N1-PLZF通过鉴定,结构正确.转染到精原细胞后能在其中表达,发挥功能,为后续研究奠定了基础,对研究PLZF调控精原细胞增殖和分化机制具有重要的意义.
目的:構建真覈錶達重組質粒pEGFP-N1-PLZF,併瞭解其在大鼠精原細胞中的融閤蛋白錶達情況.方法:參攷分子剋隆技術,採用RT-PCR的方法從大鼠睪汍組織中擴增早幼粒細胞白血病鋅指蛋白(PLZF),將該基因連接剋隆到含有增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)報告基因的真覈錶達載體pEGFP-N1上,併用雙酶切、測序進行鑒定;將重組質粒用脂質體轉染的方法導入精原細胞中,觀察有無熒光的錶達及用Western blot檢測蛋白錶達情況.結果:實驗從大鼠睪汍組織中穫取瞭編碼plzf基因的全序列cDNA,產生瞭2 kb的目的插入片段,與pEGFP-N1載體連接後經酶切電泳鑒定及DNA測序證實序列正確;重組質粒轉染精原細胞24 h後在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,併用Western 1blot:檢測到106 kD目的蛋白的錶達.結論:新構建的重組質粒pEGFP-N1-PLZF通過鑒定,結構正確.轉染到精原細胞後能在其中錶達,髮揮功能,為後續研究奠定瞭基礎,對研究PLZF調控精原細胞增殖和分化機製具有重要的意義.
목적:구건진핵표체중조질립pEGFP-N1-PLZF,병료해기재대서정원세포중적융합단백표체정황.방법:삼고분자극륭기술,채용RT-PCR적방법종대서고환조직중확증조유립세포백혈병자지단백(PLZF),장해기인련접극륭도함유증강형록색형광단백(EGFP)보고기인적진핵표체재체pEGFP-N1상,병용쌍매절、측서진행감정;장중조질립용지질체전염적방법도입정원세포중,관찰유무형광적표체급용Western blot검측단백표체정황.결과:실험종대서고환조직중획취료편마plzf기인적전서렬cDNA,산생료2 kb적목적삽입편단,여pEGFP-N1재체련접후경매절전영감정급DNA측서증실서렬정학;중조질립전염정원세포24 h후재형광현미경하관찰도록색형광,병용Western 1blot:검측도106 kD목적단백적표체.결론:신구건적중조질립pEGFP-N1-PLZF통과감정,결구정학.전염도정원세포후능재기중표체,발휘공능,위후속연구전정료기출,대연구PLZF조공정원세포증식화분화궤제구유중요적의의.
