人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达
인eya2기인소간우RNA표체재체적구건급표체
Conctruction and Expression of Small Interference RNA Expression Vectors Targeting Human Gene eya2
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2008年 2期 181-184 ,共4页

    袁斌%丁丽华%熊志红%韩聚强%张浩%王晓辉%杨智洪%叶棋浓

    원빈%정려화%웅지홍%한취강%장호%왕효휘%양지홍%협기농

    eya2基因%小干扰RNA%表达%转录 eya2基因%小榦擾RNA%錶達%轉錄
    eya2기인%소간우RNA%표체%전록
    目的:设计并构建人eya2(eyes absent 2)基因小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,并观察其沉默效果.方法:以人eya2为靶基因,以pSliencer 2.1-U6 neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆茵DH5α菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Western blot和转录活性实验检测其抑制效果.结果:重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Western blot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达.结论:构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达.
    목적:설계병구건인eya2(eyes absent 2)기인소간우RNA(siRNA)적진핵표체재체,병관찰기침묵효과.방법:이인eya2위파기인,이pSliencer 2.1-U6 neo질립위재체,근거인eya2적cDNA서렬,설계함유소발잡결구적2조과핵감산서렬,장기극륭도siRNA표체재체상;전화대장간인DH5α균주,추제질립,측서분석;장중조질립전염인배신293T세포,통과형광분석、Western blot화전록활성실험검측기억제효과.결과:중조체측서결과여목적서렬상일치,증명구건료eya2siRNA진핵표체재체;형광관찰표명siRNA능현저감약세포중록색형광강도,억제eya2기인표체;Western blot분석증명구건적siRNA능유효억제외원성급내원성eya2기인표체;전록활성측정표명,구건적siRNA능유효억제eya2기인표체.결론:구건료eya2 siRNA진핵표체재체,해siRNA능유효지억제eya2기인표체.
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